丹參素對大鼠減體積肝移植后肝臟再生的影響.pdf

1、目的：
　　 本實驗在穩(wěn)定建立大鼠60％減體積肝移植模型基礎上，采用高效液相色譜法測定純度超過98％，劑量為1mg·kg-1·d-1的丹參素，經大鼠腹腔注射，對減體積肝移植后肝臟再生進行干預，以研究丹參素對肝臟再生的影響。
　　 方法：
　　 1．單人直視下大鼠減體積肝移植模型的建立
　　 (1)采用改良的“二袖套法”，單人直視下操作，建立雄性SD大鼠減體積肝移植模型，對預實驗階段和正式實驗階段圍手術期時

2、間、手術成功率及術后1周存活率進行比較
　　 (2)分析術后24小時內受體大鼠死亡原因，總結單人直視下大鼠減體積肝移植模型建模技巧。
　　 2．丹參素對大鼠減體積肝移植后肝臟再生的影響
　　 (1)將受體隨機分為生理鹽水對照組(n=5)和丹參素治療組（n=5），從減體積肝移植術后3h開始，分別經腹腔注射生理鹽水(0.3ml.d1)和用相同體積生理鹽水稀釋的丹參素(1.0mg·kg-1·d-1)，以后每天注射1次相

3、同劑量的生理鹽水或丹參素。于術后第1，3，6天每組各處死5只大鼠，取受體肝臟及血標本。
　　 (2)肝再生率稱取再生肝濕重，結合術中已經稱取的供肝濕重，按照公式：肝再生率=（再生肝濕重-供肝濕重）/供肝濕重×100％，計算肝再生率。
　　 (3)肝功能檢測從下腔靜脈取血，室溫靜置20min，1500r離心10min，取血清后送溫州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科檢測，采用全自動生化分析儀檢測血清ALT、ALB水平。
　　

4、 (4)病理學改變沿縱軸取肝中葉約1.0cm×1.0cm×0.3cm大小組織塊，置于4％多聚甲醛中固定24h后包埋切片，HE染色后光鏡下觀察肝組織損傷、單核細胞浸潤及肝有絲分裂細胞。
　　 (5)肝組織PCNA標記指數(shù)采用免疫組化SP法檢測，細胞核呈棕黃色者為PCNA陽性細胞，每張切片隨機觀察5個視野(200×)，按照陽性細胞數(shù)/有核細胞數(shù)×100％，計算陽性細胞百分數(shù)，取其均值，即PCNA標記指數(shù)。
　　 (6)肝組織

5、TNF-α、IL-6取0.2克肝組織，加入冰生理鹽水使得終體積為2ml。采用電動勻漿器，轉速7000r/min，勻漿5min，再3500r離心15min，取上清，用ELISA法檢測肝組織TNF-α、IL-6的表達。
　　 結果：
　　 1．成功建立大鼠減體積肝移植模型。供肝濕重占修剪前全肝濕重的（59±2）％。預實驗62次，無肝期(27.67±4.62)min，手術成功率32.3％，1周存活率8.1％，改進操作技巧后正式

6、實驗45次，無肝期縮短至(16.27±0.88)min，手術成功率及1周存活率分別為93.3％、66.7％。
　　 2．肝再生率兩組肝再生率均呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。術后第1、3天，兩組肝再生率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，術后第6天，丹參素治療組再生率較生理鹽水對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3．血清AL、ALB水平兩組大鼠血清ALT隨著術后各時間點推移逐漸降低，血清ALB隨著術后各時間點推移

7、逐漸上升。與生理鹽水對照組比較，丹參素治療組術后第3、6天血清ALT均明顯降低，血清ALB均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　 4.病理學改變兩組大鼠術后第1、3天肝臟匯管區(qū)均可見少量單核細胞浸潤，肝竇輕度擴張，未見單核細胞浸潤，可見肝細胞水腫變性，術后第6天，生理鹽水對照組匯管區(qū)單核細胞浸潤加重，并可見肝竇明顯擴張，竇內單核細胞浸潤，但肝臟結構基本正常，未見壞死肝細胞，丹參素治療組與之相比，匯管區(qū)單核細胞浸潤

8、較少，肝細胞水腫程度輕。兩組術后第1天，未見肝有絲分裂細胞，術后第3天均出現(xiàn)較多的肝有絲分裂細胞，但兩組未見明顯區(qū)別。術后第6天，丹參素治療組肝有絲分裂細胞較生理鹽水對照組多。
　　 5．肝組織PCNA標記指數(shù)兩組PCNA標記指數(shù)隨時間點的推移逐漸上升。術后第1、3天，兩組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。術后第6天，丹參素治療組PCNA標記指數(shù)明顯高于生理鹽水對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 6．肝組織

9、TNF-α、IL-6兩組大鼠各時間點肝組織TNF-α、IL-6均逐漸降低。兩組大鼠術后1d肝組織TNF-α、IL-6無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。丹參素治療組術后3、6d肝組織TNF-α、IL-6均明顯低于生理鹽水對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1．改進單人直視操作技巧后建立的大鼠減體積肝移植模型，穩(wěn)定可靠，適用于減體積肝移植后肝再生機制及其干預手段的研究；
　　 2．丹參素可以促