維生素D與糖尿病微血管并發(fā)癥的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分血清25(OH)D水平在糖尿病微血管并發(fā)癥中的變化及意義
　　目的：探討血清25(OH)D水平在糖尿病微血管并發(fā)癥中的變化，分析血清25(OH)D水平與糖尿病微血管并發(fā)癥（糖尿病周圍神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變和糖尿病腎?。┑南嚓P(guān)性，為早期預(yù)防及早期治療糖尿病微血管并發(fā)癥提供依據(jù)。
　　方法：于2013年1月-2013年8月收集石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科2型糖尿病住院患者300例，選擇健康體檢者125人作

2、為正常對照組，所有受試者均簽署知情同意書。收集所有受試者的臨床資料，采集空腹血樣本檢測25(OH)D及常規(guī)檢查，包括 Cr、Ca、P、HbA1c、TC、TG、LDL-c和HDL-c，收集2型糖尿病患者晨尿檢測尿微量白蛋白/尿肌酐的比值（UACR），采用免散瞳眼底照相機(jī)對患者進(jìn)行眼底檢查，所有患者均接受神經(jīng)癥狀/神經(jīng)缺陷評分(NSS/NDS)和神經(jīng)電生理檢測。分析血清25(OH)D水平與糖尿病微血管并發(fā)癥的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.2型

3、糖尿病患者血清25(OH)D水平（50.10±29.90nmol/L）較正常對照組下降（69.25±31.20nmol/L），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。糖尿病組有74.7％的受試者存在血清25(OH)D缺乏，對照組有59.2%的受試者存在血清25(OH)D缺乏，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組在年齡、性別構(gòu)成、TG、 HDL-c、Cr、Ca和P無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而與對照組相比，糖尿病組BMI、SBP、DBP

4、、TC和LDL-c均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.根據(jù)血清25(OH)D水平，將糖尿病患者分為25(OH)D缺乏組和25(OH)D正常組，比較相關(guān)臨床指標(biāo)，結(jié)果顯示，兩組在年齡、病程、SBP、DBP、FBS、TC、TG、HDL-c、LDL-c和Cr均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。25(OH)D缺乏組的糖尿病患者BMI和HbA1c高于25(OH)D正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；25(OH)D缺乏組的糖

5、尿病患者合并DPN、DR和DN發(fā)生率高于25(OH)D正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.合并DPN患者的血清25(OH)D水平（40.75±23.75nmol/L）較未合并DPN患者（54.50±24.50nmol/L）降低，合并DR患者的血清25(OH)D水平（41.55±26.00nmol/L）較未合并DR患者（54.75±26.25nmol/L）降低，合并DN患者的血清25(OH)D水平（42.35±26

6、.83nmol/L）較未合并DN患者（53.90±22.14nmol/L）降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)生的影響因素分析：以是否合并DPN為因變量，單因素分析顯示25(OH)D、病程、HbA1c、SBP、TC和LDL-c與DPN發(fā)病有關(guān)（P＜0.05），對入選的相關(guān)因素行 Logistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示，血清25(OH)D與DPN的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，是DPN的保護(hù)性因素，病程和HbA1

7、c與DPN的發(fā)生呈正相關(guān)，是DPN的危險因素。
　　5.糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生的影響因素分析：以是否合并DR為因變量，單因素分析顯示25(OH)D、年齡、病程、BMI和HbA1c與DR發(fā)病有關(guān)（P＜0.05），對入選的相關(guān)因素行 Logistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示血清25(OH)D與DR的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，是DR的保護(hù)性因素，年齡與DR的發(fā)生呈正相關(guān)，是DR的危險因素。
　　6.糖尿病腎病發(fā)生的影響因素分析：以是否合并DN為因

8、變量，單因素分析顯示25(OH)D、年齡、病程、HbA1c、SBP和LDL-c與DN發(fā)病有關(guān)（P＜0.05），對入選的相關(guān)因素行 Logistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示血清25(OH)D與DN的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，是DN的保護(hù)性因素，病程和SBP的發(fā)生呈正相關(guān)，是DN的危險因素。
　　結(jié)論：2型糖尿病及合并微血管并發(fā)癥的患者體內(nèi)血清25(OH)D水平下降，血清25(OH)D水平下降與糖尿病微血管并發(fā)癥（糖尿病周圍神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病

9、變、糖尿病腎病）的發(fā)生密切相關(guān)。血清25(OH)D是糖尿病微血管并發(fā)癥的保護(hù)性因素，補(bǔ)充維生素D是否能預(yù)防和改善糖尿病微血管并發(fā)癥的發(fā)生及進(jìn)展需進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　第二部分活性維生素D3對糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)的保護(hù)作用
　　目的：神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏和氧化應(yīng)激在糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)生發(fā)展過程中起重要的作用，研究表明活性維生素D3[1,25(OH)2D3]具有神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用，前一部分的研究結(jié)果表明維生素D缺乏與

10、糖尿病周圍神經(jīng)病變的發(fā)生密切相關(guān)。然而，1,25(OH)2D3是否在糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病過程中起作用，目前尚不清楚。因此，本部分建立糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠動物模型，采用活性維生素D3[1,25(OH)2D3]干預(yù)，初步探討活性維生素D3對糖尿病周圍神經(jīng)病變的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　方法：將30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，正常組（CT）和模型組，后者采用60mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病模型，造模成功的標(biāo)準(zhǔn)為血糖

11、≥16.7mmol/L。將模型組大鼠再隨機(jī)分為兩組：糖尿病組（DM）及糖尿病+1,25(OH)2D3干預(yù)組
　?。―M+VD3）。CT組和DM組予以生理鹽水灌胃，DM+VD3組予以1,25(OH)2D3灌胃。每周檢測空腹血糖，每4周檢測坐骨神經(jīng)運(yùn)動傳導(dǎo)速度。12周后將實(shí)驗(yàn)動物處死，取坐骨神經(jīng)，觀察各組大鼠坐骨神經(jīng)病理變化，分別采用免疫組織化學(xué)法和Western Blot檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF和NT-3，以及NADPH氧化酶P22p

12、hox和NF-κB p65蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.空腹血糖與同時間點(diǎn)CT組大鼠血糖比較，DM組和DM+VD3組大鼠在干預(yù)前及干預(yù)4周、8周和12周后的空腹血糖值均明顯升高（P<0.01）；與DM組大鼠比較，DM+VD3組大鼠干預(yù)4周和8周后空腹血糖值無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但干預(yù)12周后空腹血糖下降(P<0.05)；DM+VD3組大鼠空腹血糖在1,25(OH)2D3干預(yù)12周后比干預(yù)前下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

13、0.05）。
　　2.神經(jīng)傳導(dǎo)速度與同時間點(diǎn)CT組比較，DM組和DM+VD3組大鼠的坐骨神經(jīng)運(yùn)動傳導(dǎo)速度均顯著降低（P<0.01)；1,25(OH)2D3干預(yù)8周后，與同時間點(diǎn)的DM組比較，DM+VD3組大鼠的坐骨神經(jīng)運(yùn)動傳導(dǎo)速度有所增長，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。干預(yù)12周后，DM+VD3組大鼠的坐骨神經(jīng)運(yùn)動傳導(dǎo)速度高于同時間點(diǎn)的DM組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　3.坐骨神經(jīng)HE染色結(jié)果 CT組大

14、鼠坐骨神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)緊密、排列整齊、分布均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，單個纖維飽滿；DM組神經(jīng)纖維排列疏松、間隙變大，多處發(fā)生變性及斷裂；與DM組比較，DM+VD3組大鼠神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)較緊密，排列較整齊，變性與斷裂減少。
　　4.坐骨神經(jīng)NGF的表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：NGF在CT組大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞中表達(dá)呈強(qiáng)陽性，DM組坐骨神經(jīng)NGF的陽性表達(dá)比CT組減少，DM+VD3組坐骨神經(jīng)NGF的陽性表達(dá)高于DM組。圖像處理分析結(jié)果顯示，與CT組比

15、較，DM組的積分光密度（IOD）值降低（P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組的IOD值升高（P<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示：與CT組比較，DM組大鼠坐骨神經(jīng)組織NGF蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組NGF蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)。
　　5.坐骨神經(jīng)NT-3的表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：NT-3在CT組大鼠坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞中表達(dá)呈強(qiáng)陽性，DM組坐骨神經(jīng)NT-3的陽性表達(dá)比

16、CT組減少，DM+VD3組坐骨神經(jīng)NT-3的陽性表達(dá)高于DM組。圖像處理分析結(jié)果顯示，與CT組比較，DM組的IOD值降低（P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組的IOD值升高（P<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示：與CT組比較，DM組大鼠坐骨神經(jīng)組織NT-3蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組NT-3蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)。
　　6.坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶P22phox的表達(dá)

17、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：NADPH氧化酶P22phox主要表達(dá)于雪旺細(xì)胞中，陽性區(qū)域被染呈棕黃色。CT組大鼠坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶P22phox表達(dá)呈弱陽性；DM組大鼠坐骨神經(jīng)NADPH氧化酶P22phox表達(dá)呈強(qiáng)陽性；DM+VD3組NADPH氧化酶P22phox的陽性表達(dá)低于DM組。圖像分析結(jié)果顯示，與CT組比較，DM組的IOD值增高(P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組的IOD值降低(P<0.05)。Western Blot

18、結(jié)果顯示：與CT組比較，DM組大鼠坐骨神經(jīng)組織中的NADPH氧化酶P22phox蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組NADPH氧化酶P22phox蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)。
　　7.坐骨神經(jīng)NF-κB p65蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：NF-κB p65主要表達(dá)于坐骨神經(jīng)雪旺細(xì)胞內(nèi)，陽性區(qū)域被染呈棕黃色。CT組大鼠坐骨神經(jīng)NF-κBp65表達(dá)呈弱陽性；DM組大鼠坐骨神經(jīng)NF-κB p65表

19、達(dá)呈強(qiáng)陽性；DM+VD3組NF-κB p65的陽性表達(dá)低于DM組。圖像分析結(jié)果顯示：與CT組比較，DM組的IOD值增高(P<0.05)；與DM組比較，DM+VD3組的IOD值降低(P<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示：與CT組比較，DM組大鼠坐骨神經(jīng)組織中的NF-κB p65蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)，與DM組比較，DM+VD3組NF-κB p65蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：1,25(OH)2D