GnRHR在胃癌發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉移中的作用及機制研究.pdf

1、目的：檢測GnRHR在胃癌組織中的表達情況，分析其與胃癌患者預后的相關性，探討GnRHR在胃癌發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉移中的作用及相關分子機制。
　　方法：應用RT-PCR方法檢測48例術前未接受任何治療的胃癌患者病理標本中腫瘤和腫瘤旁組織內(nèi)促性腺激素釋放激素受體（GnRHR）mRNA的表達；免疫組化分析腫瘤組織及腫瘤旁組織中GnRHR蛋白的表達。通過卡方檢驗分析GnRHR表達與腫瘤分期、淋巴結轉移及遠處轉移等臨床病理參數(shù)的相關性，

2、采用Kaplan–Meier和秩檢驗進行生存分析，探討GnRHR表達對胃癌患者預后的影響。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標本分為分化差、分化良好兩組，應用免疫組織化SP及原位定量法，對48例不同分化程度的胃癌組織中GnRHR、表皮生長因子受體（EGFR）的表達進行檢測及半定量分析。Western blot檢測三種不同分化程度胃癌細胞中GnRHR表達情況；采用不同濃度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×

3、10-6mol/l)GnRH激動劑醋酸曲普瑞林作用于三種不同分化程度的胃癌細胞株，MTT實驗觀察其對胃癌細胞增殖的影響。Western blot檢測GnRHR及分化相關蛋白表達情況。采用transwell小室檢測GnRH激動劑醋酸曲普瑞林激活胃癌細胞GnRHR后細胞侵襲和遷移能力；Western blot檢測GnRHR激活后胃癌細胞EMT相關蛋白E-cad、vimentin及snail的表達情況。采用酪氨酸磷酸酶抑制劑正釩酸鈉激活EGF

4、R磷酸化后MTT檢測細胞增殖情況、western blot檢測細胞增殖分化相關蛋白及EMT相關蛋白表達情況。
　　結果：為了研究GnRHR在胃癌中的作用，我們通過RT-PCR及免疫組化分別檢測48例胃癌組織及相應的癌旁組織中GnRHR mRNA及GnRHR蛋白表達，結果顯示GnRHR mRNA在胃癌組織中表達明顯高于癌旁組織(-10.06±1.28 vs-12.43±1.33，p<0.05)。GnRHR蛋白主要定位在細胞漿，在48

5、例胃癌患者中，超過一半胃癌組織中GnRHR染色陰性(52.08％,25/48)。為了探討GnRHR與胃癌患者臨床參數(shù)及預后的相關性，我們收集48例胃癌患者臨床及隨訪資料，采用統(tǒng)計學軟件分析發(fā)現(xiàn)：GnRHR mRNA表達與腫瘤淋巴結轉移、遠處轉移以及TNM分期有關；GnRHR mRNA表達與患者總生存率相關，并且GnRHR mRNA低表達(-ΔCt<-10.06)患者總生存率較差(p=0.003;HR=0.42,95%CI:0.22-0.

6、87)。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標本分為分化差、分化良好兩組，各種不同分化的癌組織均顯示不同程度的 GnRHR和EGFR陽性免疫反應，GnRHR表達陽性23例（47.92%），EGFR表達陽性26例（54.16%），原位定量顯示GnRHR的表達分化良好20例、分化差3例，隨著組織分化程度增高而增高，EGFR的表達分化良好13例、分化差13例，隨著組織分化程度增高而降低（P<0.05）。相關性分析顯示：不同分化程度胃癌組織中

7、GnRHR與EGFR表達成負相關并具有統(tǒng)計學意義；為了進一步探討 GnRHR與 EGFR的相關性以及GnRHR在胃癌的發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉移中的作用及相關分子機制，我們通過細胞學實驗從細胞增殖、細胞分化、細胞侵襲轉移三方面進行研究。
　　結果顯示：不同濃度醋酸曲普瑞林作用胃癌細胞不同時間抑制胃癌細胞增殖，western blot結果顯示GnRHR通過EGFR-ERK通路抑制胃癌細胞增殖；此外，GnRHR在不同分化程度胃癌細胞中表

8、達不同，分化程度越高，GnRHR表達越高，進一步western blot結果顯示GnRHR通過EGFR-CDK1通路調(diào)控胃癌細胞分化；胃癌組織中GnRHR與腫瘤轉移相關，為了從細胞水平研究GnRHR對胃癌細胞侵襲轉移的影響，采用醋酸曲普瑞林誘導GnRHR表達后transwell小室檢測胃癌細胞遷移及侵襲能力，結果顯示：醋酸曲普瑞林作用于胃癌細胞后，透膜細胞數(shù)明顯減少。提示誘導GnRHR表達抑制胃癌細胞遷移及侵襲能力。進一步western