β-半乳糖苷α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶2的表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后以及腫瘤進(jìn)展的相關(guān)性研究.pdf

1、乳腺癌是女性發(fā)病率第一位的腫瘤，也是女性中常見的腫瘤相關(guān)死因。乳腺癌的診斷治療措施還不是非常令人滿意，需要研究人員們?nèi)ヌ剿餍碌脑\斷或治療的靶點。β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶1(ST6Gal1)是目前研究最為透徹的唾液酸轉(zhuǎn)移酶之一，在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤中均出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)，且與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。作為ST6Gal1的同工酶，ST6Gal2在近年來被人發(fā)現(xiàn)。然而目前對ST6Gal2功能所知甚少，ST6Gal2對腫瘤進(jìn)展的作用

2、目前仍不清楚。
　　為了研究ST6Gal2在乳腺癌中的作用，我們收集了40例乳腺癌臨床標(biāo)本和相應(yīng)的癌旁正常乳腺組織。我們運用RT-PCR和免疫組化染色來研究ST6Gal2在腫瘤組織中的表達(dá)是否出現(xiàn)升高。我們接下來從癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)庫下載了778例乳腺癌病人的基因表達(dá)譜和病人疾病特征的數(shù)據(jù)，并根據(jù)患者腫瘤的ST6Gal2表達(dá)水平將其分為兩組:ST6Gal2高表達(dá)組和低表達(dá)組，用Fisher確切概率法比較其病理特征的差別

3、:如病理分期，ER，PR，HER2表達(dá)水平，年齡等。此外，我們繪制了兩組病人的生存率曲線，用對數(shù)秩和檢驗(Log-rank)統(tǒng)計了兩組生存率的差異。隨后我們選取了5珠乳腺癌細(xì)胞株，用Western Blot檢測了它們ST6Gal2的表達(dá)水平，并在其中挑選了兩組相對ST6Gal2高表達(dá)的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)實驗。我們用siRNA沉默了兩株細(xì)胞中ST6Gal2的表達(dá)，用RT-PCR檢測了沉默的效果。然后用CCK-8和流式細(xì)胞儀檢測了細(xì)胞的增值和周

4、期變化，并用纖連蛋白包被的12孔板和Transwell實驗檢測了細(xì)胞的粘附和侵襲能力的變化。為了做進(jìn)一步的機制研究，我們用前面從TCGA下載的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)，做基因富集分析(GSEA)來研究ST6Gal2的表達(dá)與粘附和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因集中基因表達(dá)的相關(guān)性。并選取了具有代表性的促進(jìn)侵襲的基因，用RT-PCR和Western Blot檢測了ST6Gal2的沉默對這些基因表達(dá)的影響。
　　我們通過RT-PCR和免疫組化發(fā)現(xiàn)，相比較正常組織

5、，ST6Ga12的表達(dá)在腫瘤組織中升高。我們通過分析TCGA數(shù)據(jù)得出，ST6Gal2的高表達(dá)和年齡以及HER2的表達(dá)水平具有正相關(guān)性。重要的是，我們發(fā)現(xiàn)，ST6Gal2的高表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后不佳顯著相關(guān)。我們通過siRNA沉默兩株乳腺癌細(xì)胞株ST6Gal2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的生長受到抑制，細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1期周期阻滯，且細(xì)胞與基質(zhì)的粘附和侵襲能力下降。GSEA分析結(jié)果顯示，ST6Gal2的高表達(dá)與粘附和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因集中的基因的表達(dá)升高出現(xiàn)