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文檔簡介
1、本文從實驗室保藏的能有效拆分制備L-薄荷醇的菌株中克隆脂肪酶(Pseudomonas alcaligenes X1和Stenotrophomonas maltophilia X2)，實現(xiàn)其在大腸桿菌中高效表達，并對表達產(chǎn)物進行了酶學(xué)性質(zhì)研究。
分別構(gòu)建了兩個菌種的基因文庫，通過平板水解圈法初篩以及氣相色譜驗證，成功克隆到序列長度分別為1575bp的pal和1518bp的sml，通過氨基酸序列的分析，兩酶都包含活性中心GISYG
2、，該酶屬于Serine水解酶類型，催化中心包括Ser-Asp-His。通過氨基酸序列對比，構(gòu)建了進化樹及結(jié)構(gòu)分析。
以pET30a(+)為載體，E.coil BL21(DE3)為宿主實現(xiàn)兩酶的表達，蛋白大小為51kDa。經(jīng)優(yōu)化表達后，兩酶的水解p-NPO活力分別達到89000U/L和90600U/L。經(jīng)鎳離子柱親和純化后，對兩酶進行酶學(xué)性質(zhì)分析，分別考察了酶反應(yīng)的最適溫度、pH、底物特異性以及金屬離子對酶的作用。利用重組脂肪酶
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