關(guān)節(jié)腔注射用甲氨蝶呤溫敏凝膠的研究.pdf

1、關(guān)節(jié)腔注射是將藥物直接輸送至類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者炎癥部位的一種局部治療手段，當(dāng)前多以溶液劑劑型為主，注射后在關(guān)節(jié)腔內(nèi)迅速消除難以達(dá)到持續(xù)的治療作用，往往需多次重復(fù)給藥。所以現(xiàn)階段局部注射用溫敏凝膠制劑作為關(guān)節(jié)腔注射緩控釋劑型，已逐漸被廣泛研究,該劑型通過(guò)具有溫敏性能的高分子共聚物材料作為載體，注射后在關(guān)節(jié)腔內(nèi)發(fā)生相變成半固體狀，以達(dá)到增加藥物在關(guān)節(jié)腔滯留時(shí)間的目的，可有效提高關(guān)節(jié)腔內(nèi)的局部

2、藥物濃度,并降低口服藥物產(chǎn)生的胃腸道等全身毒副作用，減少患者注射次數(shù)，提高病人的順應(yīng)性及治療效果。
　　當(dāng)前已有學(xué)者采用左旋聚乳酸[1]（PLLA）、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物[2]（PLGA）為載體制備關(guān)節(jié)腔注射用甲氨蝶呤緩釋微球，但微球制劑往往存在突釋現(xiàn)象，且注射初期會(huì)產(chǎn)生急性炎癥反應(yīng)。馬桂蕾等[3]利用聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯（PCL-PEG-PCL）作為載體材料制備甲氨蝶呤溫敏凝膠并對(duì)其進(jìn)行體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究，注射后24

3、h甲氨蝶呤的血藥濃度仍高于檢測(cè)限。然而，該劑型采用乙腈作為溶劑，需嚴(yán)格控制其溶劑殘留量在安全值內(nèi)。
　　本課題選用具有增溶作用的兩親性嵌段共聚物聚丙交酯-乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯-乙交酯（PLGA-PEG-PLGA）為載體，甘露醇為黏度調(diào)節(jié)劑采用物理混合法制備可供關(guān)節(jié)腔注射的甲氨蝶呤溫度敏感型凝膠,并以膠凝溫度為指標(biāo),并選取對(duì)膠凝溫度影響較大的PLGA-PEG-PLGA、甲氨蝶呤、甘露醇用量作為考察因素，以正交試驗(yàn)優(yōu)化篩選出甲氨

4、蝶呤溫敏凝膠的優(yōu)化處方，當(dāng)PLGA-PEG-PLGA濃度為25％，甲氨蝶呤0.20%，甘露醇0.10%; PLGA-PEG-PLGA25%，甲氨蝶呤0.20%，甘露醇0.10%時(shí)，凝膠溫度為35℃。并對(duì)PLGA-PEG-PLGA共聚物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。
　　建立了甲氨蝶呤溫敏凝膠的質(zhì)量控制方法，采用高效液相色譜法測(cè)定甲氨蝶呤溫敏凝膠藥物含量,對(duì)3批自制的甲氨蝶呤溫敏凝膠進(jìn)行了考察，結(jié)果表明該法專屬性強(qiáng)、精密度高，3批樣品中的平均載藥率

5、均達(dá)到90%以上。
　　考察溫敏凝膠的流變學(xué)特性,研究其相變過(guò)程中的流變學(xué)變化。
　　采用透析袋法考察凝膠聚合物濃度及載藥量對(duì)甲氨蝶呤溫敏凝膠體外釋藥情況的影響，并研究其體外釋藥機(jī)制。結(jié)果表明，PLGA-PEG-PLGA濃度為25%的甲氨蝶呤溫敏凝膠在體外緩釋效果最佳，可持續(xù)釋放藥物12d以上，釋放率可達(dá)90.58%。將釋放度與時(shí)間分別對(duì)于不同釋放模型進(jìn)行擬合，發(fā)現(xiàn)Ritger-peppas模型的R值最大，推測(cè)其釋放過(guò)程是以

6、藥物擴(kuò)散與凝膠溶蝕相結(jié)合的方式。
　　由于該制劑具有溫敏性能，本研究采用60Co輻射滅菌法滅菌，對(duì)滅菌前后溫敏凝膠的外觀形態(tài)、溫敏性能、藥物含量及體外釋放行為進(jìn)行考察。結(jié)果表明，輻射滅菌對(duì)該制劑無(wú)明顯影響。通過(guò)影響因素試驗(yàn)及長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果表明，該制劑在高溫、光照下不穩(wěn)定，應(yīng)在低溫下、避光保存。
　　于大鼠皮下囊內(nèi)注射含青霉素鈉的羧甲基纖維素鈉和脂多糖溶液建立大鼠皮下氣囊炎癥模型，造模成功后分別注射生理鹽水、甲氨蝶呤溶液

7、及甲氨蝶呤溫敏凝膠，并于給藥后第3、6、9天采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組大鼠滲出液中腫瘤壞死因子水平，同時(shí)取皮下囊皮膚制組織切片觀察其在大鼠體內(nèi)的持續(xù)治療效果。結(jié)果顯示，甲氨蝶呤溶液組給藥后第3d、6d、9d的腫瘤壞死因子水平與生理鹽水組相比分別下調(diào)了27.31%±4.37%、42.70%±3.92%、52.28%±4.00%；而甲氨蝶呤凝膠組給藥后第3d、6d、9d的腫瘤壞死因子水平與生理鹽水組相比分別下調(diào)了24.28%±3.05%、5

8、2.45%±3.22%、68.96%±2.85%。組織切片顯微照片結(jié)果顯示，甲氨蝶呤溶液組和甲氨蝶呤凝膠組相對(duì)生理鹽水組炎癥均有改善，而甲氨蝶呤凝膠組在給藥后9d時(shí)炎性細(xì)胞仍保持在較低水平，與溶液組具有顯著性差異，長(zhǎng)期治療效果優(yōu)于甲氨蝶呤溶液。
　　取SD大鼠，皮下注射空氣造模后，分別于每組大鼠皮下囊內(nèi)注入生理鹽水和甲氨蝶呤溫敏凝膠。于注射藥物后第1、3、7d分別并取大鼠背部囊處皮膚，考察溫敏凝膠的生物相容性情況。結(jié)果表明給藥后無(wú)

9、明顯炎癥細(xì)胞，7d后兩組間未見顯著性差異。
　　分別在KM小鼠皮下囊處注射混有近紅外染料新吲哚菁綠的甲氨蝶呤溶液和甲氨蝶呤凝膠后，定時(shí)觀察皮下囊處的熒光殘留強(qiáng)度，采用小動(dòng)物活體成像儀考察溫敏凝膠的局部滯留性。結(jié)果顯示，甲氨蝶呤溶液組在注射后1d已基本消除，而甲氨蝶呤凝膠組在9d時(shí)的滯留量為17.11%，可顯著增加藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間。
　　綜上所述，本研究制備的甲氨蝶呤溫敏凝膠符合注射劑的一般質(zhì)量要求，，注射入關(guān)節(jié)腔后可迅速