sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)與胎膜早破及圍產(chǎn)兒感染的相關(guān)性研究.pdf

1、胎膜早破(PROM)即母體臨產(chǎn)前發(fā)生胎膜破裂，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢。導(dǎo)致胎膜早破的因素很多，研究發(fā)現(xiàn) PROM與感染密切相關(guān)，特別是革蘭陰性菌引起的感染，易引起胎膜結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致胎膜薄弱處發(fā)生破裂。破膜后，羊水抑菌作用減弱，可增加上行感染的機(jī)會，破膜時(shí)間超過24小時(shí)，感染率可增加5～10倍，合并絨毛膜羊膜炎的PROM孕婦，易發(fā)生胎盤早剝、產(chǎn)后出血、敗血癥等并發(fā)癥；炎癥侵及胎兒后，可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)感染，嚴(yán)重時(shí)危及新生兒生命。臨床常把產(chǎn)后

2、一周內(nèi)的新生兒定義為圍產(chǎn)兒，我國 PROM合并圍產(chǎn)兒死亡率為2.5％～11%，因此，尋找可以早期診斷PROM及PROM合并圍產(chǎn)兒感染的敏感性、特異性強(qiáng)的指標(biāo)是產(chǎn)科醫(yī)生面臨的重要問題。
　　白細(xì)胞分化抗原14(CD14)是細(xì)菌脂多糖(LPS)的高親和受體，CD14是單核-巨噬細(xì)胞表面的特異性標(biāo)志物，CD14分子有兩種存在形式：一種是位于細(xì)胞膜上的膜結(jié)合型CD14(mCD14)，另一種是游離在體液中的可溶性CD14(sCD14)，sC

3、D14的主要作用是與病原體抗原相結(jié)合，并進(jìn)一步介導(dǎo)機(jī)體炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)破膜時(shí)間大于24小時(shí)患者羊水中的sCD14含量顯著升高，同時(shí)伴有CRP、IL-6等炎癥指標(biāo)的升高，推測與羊膜腔的炎癥發(fā)生有關(guān)。
　　髓樣細(xì)胞表達(dá)的觸發(fā)受體1(TREM1)是TREM家族活化型受體成員之一，在外周血中主要分布于中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及成熟的單核細(xì)胞表面。正常情況下，TREM-1呈低水平表達(dá)，在機(jī)體感染時(shí)，數(shù)小時(shí)內(nèi)可使其在白細(xì)胞表面大量表達(dá)，且與其配

4、體結(jié)合后，啟動并放大免疫反應(yīng)，促進(jìn)炎性因子分泌和誘導(dǎo)促炎癥因子釋放。近年來，TREM-1在感染性疾病診斷方面越來越受到重視。研究發(fā)現(xiàn)胎膜中 TREM-1的水平變化與PROM及亞臨床感染的發(fā)生具有明顯相關(guān)性。
　　目的:本研究通過檢測母血、臍血、新生兒外周血中 sCD14及中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平及它們之間的相關(guān)性，探討 sCD14及中性粒細(xì)胞表面TREM-1在PROM及PROM圍產(chǎn)兒感染中的臨床意義。
　　資料與

5、方法:
　　1.研究對象:選取2014年7月～2015年7月在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院住院分娩的足月PROM初產(chǎn)孕婦60例作為PROM組，選取同期住院、因社會因素行剖宮產(chǎn)的正常妊娠婦女60例為對照組，兩組孕婦均無母體合并癥、無其他產(chǎn)科并發(fā)癥及胎兒異常情況等。胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)參照謝幸、茍文麗主編的第八版《婦產(chǎn)科學(xué)》；絨毛膜羊膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)為：電鏡下，每高倍鏡視野胎盤或胎膜任何一處中性粒細(xì)胞浸潤達(dá)11個及以上者；新生兒圍產(chǎn)期感染(新

6、生兒肺炎、新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎及新生兒早發(fā)型敗血癥)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照邵肖梅、葉鴻瑁等主編的第四版《實(shí)用新生兒學(xué)》。本研究符合醫(yī)院倫理委員會倫理要求，入選對象均簽署書面知情同意書。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1血液標(biāo)本的采集和制備:兩組孕婦均于入院后未應(yīng)用抗生素前抽取肘靜脈血5ml、胎兒娩出后抽取臍靜脈血5ml、新生兒產(chǎn)后第一天抽取靜脈血1.5ml，母血、臍血、新生兒外周血標(biāo)本各采集兩管，一管為EDTA抗凝，全血標(biāo)本保存，6小時(shí)

7、內(nèi)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測；另一管血液標(biāo)本置于普通無菌干燥試管中，待其自然凝固，于2500 r/min離心5min后，留取上清，置于-80℃冰箱保存。
　　2.2絨毛膜羊膜炎的檢查:胎盤娩出后，分別取大小約2.0cm×2.0cm的胎盤及胎膜組織，生理鹽水清洗后置于10%甲醛溶液中固定，HE染色后行胎盤病理學(xué)檢查，絨毛膜羊膜炎診斷標(biāo)準(zhǔn)為：電鏡下，每高倍鏡視野中胎盤或胎膜任何一處中性粒細(xì)胞浸潤達(dá)11個及以上者。
　　2.3 sCD14

8、和中性粒細(xì)胞表面TREM-1表達(dá)水平的檢測:采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表達(dá)水平，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:使用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，圖表制作統(tǒng)一使用GraphPad Prism5軟件，計(jì)量資料滿足正態(tài)分布采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，所有計(jì)量資料采用均數(shù)

9、±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s)表示，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.研究對象一般情況的比較:PROM組和對照組產(chǎn)婦年齡、胎齡、新生兒Apgar評分(1min，5min)、新生兒體重差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩組新生兒間性別比較χ2=0.07，P=0.80，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.PROM組和對照組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平
　

10、　2.1 PROM組和對照組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表達(dá)水平:PROM組母血、臍血、新生兒外周血中 sCD14的表達(dá)水平分別為(56.89±13.64)、(55.50±12.52)、(60.08±13.55)ng/ml,明顯高于對照組的(35.64±2.85)、(32.31±4.25)、(35.78±4.71)ng/ml；兩組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.2 PROM組和對照組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞

11、表面TREM-1的表達(dá)水平:PROM組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1平均熒光強(qiáng)度(MFI)的表達(dá)水平分別為(11.21±2.43)、(10.71±2.73)、(11.41±2.80)，明顯高于對照組的(7.30±2.14)、(5.49±1.21)、(6.27±1.72)；兩組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.相關(guān)性分析
　　3.1 PROM組與對照組母血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1表達(dá)水平分

12、別與臍血中兩者水平的相關(guān)性:PROM組母血中sCD14的水平與臍血中sCD14的水平呈正相關(guān)；PROM組母血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1的水平與臍血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平呈正相關(guān)。對照組母血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平與臍血中兩者的水平均無明顯相關(guān)性。
　　3.2 PROM組與對照組母血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平分別與新生兒外周血中兩者水平的相關(guān)性
　　:PROM組母血

13、中 sCD14的水平與新生兒外周血中 sCD14的水平呈正相關(guān)性；PROM組母血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平與新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平呈正相關(guān)性。對照組母血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平與新生兒外周血中兩者的水平均無明顯相關(guān)性。
　　3.3 PROM組與對照組臍血中sCD14、中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平分別與新生兒外周血中兩者水平的相關(guān)性
　　:PROM組臍血中 sCD1

14、4的水平與新生兒外周血中 sCD14的水平呈正相關(guān)性；PROM組臍血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平與新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平呈正相關(guān)性。對照組臍血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的水平與新生兒外周血中兩者的水平均無明顯相關(guān)性。
　　3.4 PROM組sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的相關(guān)性:PROM組母血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1呈正相關(guān)性；臍血中 sCD14和中性粒細(xì)胞表面 TR

15、EM-1呈正相關(guān)性；新生兒外周血中 sCD14和中性粒細(xì)胞表面 TREM-1呈正相關(guān)性。
　　4.不同破膜時(shí)間組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平:PROM組按破膜時(shí)間(小時(shí)，h)分為三組：破膜時(shí)間12h～24h組(A1組，n=30),破膜時(shí)間24h～36h組(A2組，n=21)，破膜時(shí)間>36 h組(A3組，n=9)。
　　4.1不同破膜時(shí)間組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表

16、達(dá)水平:A1組母血、臍血、新生兒外周血中 sCD14分別是(48.3±7.2)、(48.6±6.3)、(51.5±7.0)ng/ml；A2組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14分別是(59.9±11.8)、(56.1±11.0)、(63.5±12.3)ng/ml；A3組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14分別是(78.5±3.6)、(76.9±4.5)、(80.5±5.0)ng/ml。三組間比較顯示，母血、臍血、新生兒外周血中 sCD1

17、4的表達(dá)水平，隨破膜時(shí)間的延長而升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.2不同破膜時(shí)間組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平:A1組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1分別是(9.7±1.1)、(11.3±1.3)、(15.9±1.1)；A2組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1分別是(9.2±1.2)、(10.5±1.7)、(16.1±1.5)；A3組母血、臍血、新生兒外周血中性粒

18、細(xì)胞表面TREM-1分別是(9.7±1.1)、(11.6±1.6)、(16.7±1.7)；三組間比較顯示,母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1的表達(dá)水平，隨破膜時(shí)間的延長而升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.絨毛膜羊膜炎組與非絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平
　　:PROM組按胎盤胎膜病理學(xué)檢查結(jié)果，分為絨毛膜羊膜炎組和非絨毛膜羊膜炎組，PROM組有26

19、例診斷為絨毛膜羊膜炎(B1組，n=26)，有34例診斷為非絨毛膜羊膜炎(B2組，n=34)。
　　5.1絨毛膜羊膜炎組與非絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表達(dá)水平:絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中 sCD14分別是(63.7±12.3)、(60.8±12.4)、(66.5±12.5)ng/ml；非絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14分別是(45.2±5.7)、(46.3±5.5)、(49.

20、0±6.2)ng/ml。兩組間比較結(jié)果顯示，PROM合并絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表達(dá)水平顯著高于非絨毛膜羊膜炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.2絨毛膜羊膜炎組與非絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1的表達(dá)水平
　　絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1分別是(12.3±2.4)、(11.9±2.8)、(12.7±2.7)；非絨毛膜羊膜炎組母

21、血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1分別是(9.3±0.9)、(8.7±0.8)、(9.2±0.9)。兩組間比較結(jié)果顯示，PROM合并絨毛膜羊膜炎組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1的表達(dá)水平顯著高于非絨毛膜羊膜炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.圍產(chǎn)兒感染組與圍產(chǎn)兒非感染組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14和中性粒細(xì)胞表面TREM-1表達(dá)水平:根據(jù)PROM組孕婦所產(chǎn)新生兒圍產(chǎn)期(產(chǎn)后7日內(nèi))結(jié)局

22、，PROM組共有14例確診為圍產(chǎn)兒感染(C1組，n=14)，其中新生兒肺炎10例、新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎2例、新生兒早發(fā)型敗血癥2例。有46例確診為圍產(chǎn)兒非感染(C2組，n=46)。
　　6.1圍產(chǎn)兒感染組與圍產(chǎn)兒非感染組母血、臍血、新生兒外周血sCD14的表達(dá)水平:圍產(chǎn)兒感染組母血、臍血、新生兒外周血中 sCD14分別是(77.4±7.29)、(75.1±6.6)、(80.1±7.7)ng/ml；圍產(chǎn)兒非感染組母血、臍血、新生兒

23、外周血中sCD14分別是(50.7±7.7)、(49.5±6.1)、(54.0±7.8)ng/ml。兩組間比較結(jié)果顯示，圍產(chǎn)兒感染組母血、臍血、新生兒外周血中sCD14的表達(dá)水平顯著高于圍產(chǎn)兒非感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.2圍產(chǎn)兒感染組與圍產(chǎn)兒非感染組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面TREM-1表達(dá)水平:圍產(chǎn)兒感染組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1分別是(14.6±2.4)、(14.4±2.8)

24、、(15.1±2.8)；圍產(chǎn)兒非感染組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1分別是(10.2±1.3)、(9.6±1.4)、(10.3±1.6)。兩組間比較結(jié)果顯示，圍產(chǎn)兒感染組母血、臍血、新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面 TREM-1的表達(dá)水平顯著高于圍產(chǎn)兒非感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:sCD14和中性粒細(xì)胞表面 TREM-1的表達(dá)與胎膜早破及感染的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，對胎膜早破及胎膜早破圍產(chǎn)兒感染的早期診斷