膜電位對TrkB受體活性的調(diào)節(jié).pdf

1、TrkB(Tyrosine Receptor Kinase B)受體是腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BrainDerived Neurotrophic Factor，BDNF)的主要功能受體，也是一種受體酪氨酸激酶。BDNF與細胞表面的TrkB受體結(jié)合激活TrkB受體胞內(nèi)段的酪氨酸激酶，并使TrkB受體胞內(nèi)幾個特定的酪氨酸殘基發(fā)生白磷酸化而激活下游信號通路。BDNF/TrkB參與了活性依賴的突觸可塑性調(diào)節(jié)，即神經(jīng)元活性影響B(tài)DNF對神經(jīng)元的效應(yīng)。

2、神經(jīng)元的活性可以增強BDNF在活化神經(jīng)元或突觸中的合成和分泌，也可以增強TrkB受體在活化的神經(jīng)元或突觸中的上膜表達、BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)吞、轉(zhuǎn)錄、運輸和翻譯等過程，這些過程依賴于Ca2+信號通路。但關(guān)于膜電位對TrkB受體活性的調(diào)節(jié)及其BDNF對神經(jīng)元活性依賴性調(diào)節(jié)的機制還有很多未知。本論文就膜電位對TrkB受體磷酸化水平調(diào)節(jié)的機制做了詳細的研究。 (1)免疫印記(Western Blot)檢測發(fā)現(xiàn)大鼠海馬腦片中BDNF依賴的T

3、rkB受體磷酸化(P-TrkB)水平在高[K+]細胞外液處理時高于正常[K+]細胞外液處理時。高K+處理可以增加P-TrkB/TrkB的比值。 (2)將體外轉(zhuǎn)錄的TrkB受體mRNA在非洲爪蟾卵母細胞(沒有神經(jīng)元的電壓門控通道的表達)中表達。通過western blot檢測發(fā)現(xiàn)高[K+]細胞外液處理組P-TrkB/TrkB值是正常[K+]細胞外液處理組的257±56％。 (3)為了排除胞內(nèi)Ca2+信號對TrkB受體磷

4、酸化水平的影響，用BAPTA或者BAPTA-AM阻斷胞內(nèi)Ca2+信號。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)高[K+]依然可以誘導(dǎo)TrkB受體磷酸化水平的升高，與沒有阻斷胞內(nèi)Ca2+信號時一致。 (4)這些結(jié)果強烈提示高[K+]誘導(dǎo)的去極化激活TrkB受體酪氨酸激酶而升高其磷酸化水平其機制可能是由于TrkB受體自身可以感受膜電位。為了更加直接說明膜電位對TrkB受體活性調(diào)節(jié)的機制，用cut-open電壓鉗技術(shù)檢測TrkB受體是否具有