神經(jīng)干細胞在膠原凝膠及膠原-殼聚糖支架內(nèi)的培養(yǎng).pdf

1、傳統(tǒng)的神經(jīng)干細胞培養(yǎng)模式分為“懸浮培養(yǎng)”和“單層貼壁培養(yǎng)”。但這兩種方式都存在不可回避的缺點。近年來，三維培養(yǎng)技術(shù)逐漸成為細胞培養(yǎng)領(lǐng)域研究的熱點，這種培養(yǎng)方式可以使細胞呈空間立體方式生長，使其更接近于體內(nèi)生長模式，形成類似體內(nèi)組織的結(jié)構(gòu)，發(fā)揮其功能。由于三維培養(yǎng)模式既有利于誘導細胞的定向分化及分化后表型的維持，又有望在體外構(gòu)建與各類組織、器官相應(yīng)的細胞三維生長類似物或等同物，因此，這項培養(yǎng)技術(shù)對組織工程學和臨床應(yīng)用都有重要意義。

2、 本論文采用三維培養(yǎng)模式培養(yǎng)神經(jīng)干細胞。實驗選擇使用天然的生物材料鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖復合作為細胞的支架材料。首先考察了膠原蛋白與神經(jīng)干細胞的生物相容性，包括生物安全性和生物功能性。然后將鼠尾Ⅰ型膠原蛋白與殼聚糖通過低溫凍干并交聯(lián)，再進行2次凍干制備膠原—殼聚糖復合支架，應(yīng)用掃描電鏡觀察其表面的微觀結(jié)構(gòu)，并通過細胞實驗，說明神經(jīng)干細胞與復合支架的相容性，最后采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察支架上經(jīng)免疫熒光染色后的神經(jīng)干細胞，獲得以下結(jié)果

3、： (1)膠原與神經(jīng)干細胞的生物相容性：單個神經(jīng)干細胞均勻分散在膠原凝膠內(nèi)，培養(yǎng)3天后，細胞間界限不很清楚，出現(xiàn)神經(jīng)細胞團簇：膠原凝膠中的神經(jīng)干細胞生長活力良好，大部分呈Nestin、BrdU陽性；細胞培養(yǎng)的最優(yōu)膠原濃度為0.5mg/ml，細胞的最適接種密度是1×106cells/ml。 (2)膠原—殼聚糖復合支架的制備及性能：采用低溫凍干法，5mg/ml的鼠尾Ⅰ型膠原和2％殼聚糖分別以體積比9:1、7:3、5:5制備復

4、合支架，支架的孔徑、吸水率、降解率等結(jié)果顯示，體積比為7:3的復合支架更適合于細胞的生長和粘附。 (3)統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)表明，膠原—殼聚糖復合支架具有較好的細胞親和性，神經(jīng)干細胞能夠沿著不規(guī)則的孔道壁粘附、伸展、延伸，細胞的活力檢測結(jié)果顯示：培養(yǎng)至第6天的神經(jīng)干細胞具有73±2.8％的高活率，熒光染色結(jié)果表明：復合支架內(nèi)的神經(jīng)干細胞能夠分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞，維持了干細胞的特性。 由以上實驗結(jié)果我們推斷：膠原—殼聚糖復合支架