生物法合成香蘭素和香草酸的研究.pdf

1、生物法合成香蘭素和香草酸，具有污染少、生產(chǎn)清潔、安全，副產(chǎn)物無污染等優(yōu)點，已越來越受到人們的重視。國外很多公司都紛紛加強了對生物法生產(chǎn)香蘭素和香草酸的研究，我國在這方面尚處于起步階段，因此有必要加大合作研究的力度，以使我國在生物合成香蘭素市場上能占有一席之地。
　　 本文主要對酶轉(zhuǎn)化法和微生物轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化異丁香酚或者阿魏酸生產(chǎn)香草酸和香蘭素進行了研究。
　　 1、經(jīng)過重復(fù)試驗確定，實驗室現(xiàn)有的幾種脂肪酶Novozyme

2、435，Candidasp.99-125脂肪酶，LipozymeTLIM，LipozymeRMIM并不能夠催化異丁香酚轉(zhuǎn)化生成香蘭素，因此，在從異丁香酚到香蘭素的轉(zhuǎn)化過程中可能并不存在酯化或者轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)；
　　 2、提取得到的大豆脂氧合酶LOX酶活不高，且在低溫下(20℃)相對比較穩(wěn)定，當(dāng)用LOX粗提液或者用共沉淀法制得的酶粉催化異丁香酚反應(yīng)時，間隔取樣，測定，沒有新峰出現(xiàn)，底物異丁香酚也沒有消耗，說明該反應(yīng)體系仍然存在問題，因

3、此需要從微生物中尋找合適的酶；
　　 3、在轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香草酸和香蘭素的菌株篩選實驗中，最初篩到3株可以產(chǎn)香蘭素的鏈狀菌株，但是香蘭素的產(chǎn)量非常低，進行重復(fù)實驗，3株菌的發(fā)酵液中均未檢測到香蘭素的生成，這可能是所篩到的菌株性狀不穩(wěn)定，使得其轉(zhuǎn)化異丁香酚生成香蘭素的能力下降：同時，異丁香酚對菌體有毒性作用，且在發(fā)酵液反應(yīng)過程中容易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，使得微生物酶不能和底物更好接觸，不利于反應(yīng)的進行，因此選用對微生物毒性相對較小的阿魏

4、酸為底物進行篩選；
　　 4、在轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香草酸和香蘭素的菌株篩選實驗中，篩選到一菌株StrainAl，在未優(yōu)化反應(yīng)條件的情況下，該菌株經(jīng)27h即可將1g/L阿魏酸轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成0.36g/L香草酸，其相應(yīng)的摩爾轉(zhuǎn)化率為41.6％；
　　 5、對鏈霉菌Streptomyces2036進行紫外誘變，復(fù)篩，僅有微量香蘭素生成，濃度約為2.1mg/L，但該菌株可以在短時間內(nèi)轉(zhuǎn)化阿魏酸生成香草酸；
　　 6、鏈霉菌St