油菜LACS1基因和油菜LACS4基因的克隆與鑒定.pdf

1、長鏈酰基輔酶A合成酶(LACS)把游離脂肪酸活化成為?；o酶A，從而在生物的脂肪酸的合成代謝和分解代謝中起著重要的作用。這類重要的酶參與了若干種與脂肪酸相關的代謝，包括磷脂、甘油三脂、茉莉酸的生物合成以及脂肪酸的β-氧化等。在油料作物中克隆、分析和鑒定LACS對于油脂代謝的研究具有重要意義。
　　 本研究中利用擬南芥LACS1(AtLACS1)基因為探針，通過RACE技術，在油菜花的cDNA中克隆出一個全長為2334 bp的LA

2、CS基因，命名為BnLACS1，并對其進行生物信息學分析。結果表明，BnLACS1含有一個長度為1983 bp的開放閱讀框(ORF)，預測編碼一個含有660個氨基酸殘基的蛋白。序列分析顯示，BnLACS1屬于AMP-綁定蛋白(AMPBP)超家族，編碼蛋白序列同AtLACS1具有高度的一致性。BnLACS1序列已遞交GenBank數(shù)據(jù)庫(Acc.No.EU375561)。
　　 為了鑒定BnLACS1的功能，進行了酵母互補實驗。結

3、果證明BnLACS1編碼LACS活性。底物偏好性分析表明，長鏈脂肪酸和飽和脂肪酸是BnLACS1偏好的底物。使用RT-PCR對BnLACS1進行了表達分析，發(fā)現(xiàn)BnLACS1在成熟的花和莖中有大量表達，而在萌發(fā)期的幼苗中沒有表達。BnLACS1在同含油量油菜品系的角果皮和種子的表達水平也存在差異。這些結果說明，BnLACS1可能參與油菜油脂的合成，并且影響到種子的含油量。
　　 在本研究中，構建了BnLACS1的植物表達載體，并

4、進行了轉化油菜。為下一步的檢測BnLACS1在油菜中過量表達引起的表型提供了基礎。
　　 另一個油菜LACS基因以AtLACS4為探針，通過電子克隆得到，命名為BnLACS4。該基因長2,270 bp，含有2,004 bp的ORF。對進BnLACS4行生物信息學分析，表明BnLACS4編碼一個含有667個氨基酸殘基的蛋白。序列分析顯示，BnLACS4具有真核生物LACS的分子特征。表達分析顯示，BnLACS4在根、莖、葉、花中都