以脂肪乳為載體的黃芩苷滴眼液研究.pdf

1、近年來用眼過度、人口老齡化、環(huán)境惡化等因素，使眼科疾病的發(fā)病趨勢愈來愈高。青光眼、角膜炎、結(jié)膜炎等許多眼內(nèi)疾病，如不能得到及時和有效的治療最終會導(dǎo)致反復(fù)發(fā)作甚至失明的嚴重后果。延長滯留時間，改善眼部生物利用度給藥系統(tǒng)的研究，具有廣闊的應(yīng)用前景。眼部與機體其他部位相隔離，眼前段滴入式給藥和后段侵入性給藥是眼部疾患最常見的給藥方式。眼睛的生理結(jié)構(gòu)屏障及藥物的理化性質(zhì)限制了藥物的透角膜吸收，使得角膜前半衰期短，生物利用度低。如何延長藥物在角膜

2、的滯留時間，提高給藥后的有效生物利用度是眼部給藥研究的熱點和難點。
　　黃芩苷眼用制劑臨床多用于結(jié)膜炎、角膜炎、沙眼的治療，對臨床眼科常見病原菌有很強的抑菌殺菌作用。為滿足藥效需求，傳統(tǒng)的黃芩苷眼用制劑臨床治療眼表或眼前段疾病時，多通過增加其藥物濃度或給藥頻率等方式改善，但仍存在藥物吸收量少的問題，大大地限制了藥物臨床的應(yīng)用。脂肪乳載體具有降低血管刺激性和炎癥反應(yīng)，延長藥物作用時間的優(yōu)勢。在體內(nèi)脂肪乳具有一定的被動靶向性，能夠增強

3、藥物的治療效果成為難溶性藥物優(yōu)選載體。本課題將難溶性、不穩(wěn)定的中藥單體黃芩苷包載于脂肪乳的油相中，以達到增加制劑中難溶性藥物載藥量、改善物理穩(wěn)定性的目的。磷脂作為脂肪乳的關(guān)鍵性輔料，其對產(chǎn)品的質(zhì)量可產(chǎn)生顯著影響。研究中選擇生物相溶性好的磷脂為載體制備黃芩苷脂肪乳滴眼液，給藥后在眼表形成“藥物-淚液”膜，保障了脂質(zhì)乳滴中藥物不斷向角膜細胞內(nèi)傳遞的動力，延長藥效起到緩釋作用，使得眼科局部用藥的優(yōu)勢得以發(fā)揮。
　　本研究在對黃芩苷溶解性

4、、穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上，制備了以脂肪乳為載體的黃芩苷滴眼液，以不含脂質(zhì)材料的亞微乳為對照，對比了不同載體黃芩苷的離體角膜透過性、眼內(nèi)組織分布、眼前段消除動力學(xué)和房水內(nèi)藥物動力學(xué)等內(nèi)容，同時對Labrasol和TranscutolP新型促滲劑對黃芩苷在不同載體中離體角膜透過性的影響、微透析探針在眼部應(yīng)用可行性進行有益的探索，主要內(nèi)容如下:
　　1.黃芩苷理化性質(zhì)研究
　　①溶解性研究
　　采用飽和溶解度法對34℃下黃芩苷溶

5、解性及脂水分配系數(shù)進行測定，黃芩苷在水中的平衡溶解度為138±2.8μg·mL-1，在pH2.0～7.4范圍內(nèi)，黃芩苷溶解度隨著pH的增加而增大，呈弱堿性時溶解度最大。在水中加入不同類型乳化劑均可提高藥物的溶解度，其中以Cremophor EL增溶效果最為明顯，較水溶液提高約3倍，對于不同類型之間的乳化劑增加藥物溶解度的作用不明顯。脂水分配系數(shù)是影響黃芩苷轉(zhuǎn)運速率和轉(zhuǎn)運量的主要因素之一，而不同pH緩沖液中黃芩苷的lg P均＜1，pH的改

6、變并不能改變其親脂性。
　?、诜€(wěn)定性研究
　　采用作圖法，測定黃芩苷在不同溫度、光照強度及Linger溶液中水解反應(yīng)級數(shù)、反應(yīng)速率常數(shù)、反應(yīng)活化能，結(jié)果表明黃芩苷在4500lx、直接光照和避光條件下，隨著光照的增加，其降解速率也增加。不同溫度下的反應(yīng)呈一級降解速率，隨著溫度的升高，降解的趨勢越明顯，根據(jù)阿倫尼烏斯(Arrhenius)方程，外推直線至25℃，可知黃芩苷損失10％所需要的時間(t0.9)為13.3 h。在Lin

7、ger溶液中黃芩苷的降解不符合零級、一級、二級和三級反應(yīng)模型。在此基礎(chǔ)上，對黃芩苷酸性、弱堿性和堿性條件下的降解機制經(jīng)行探究，結(jié)果表明，黃芩苷穩(wěn)定性差，當pH大于3時即開始降解，因此在不考慮其它因素影響的前提下，制劑制備過程中需控制pH為3.0～4.0之間才能保證黃芩苷的穩(wěn)定性。
　　溶解性或穩(wěn)定性中黃芩苷含量測定采用UV-Vis分光光度法或HPLC分析方法，所建立的方法簡便、準確、靈敏度高，可作為黃芩苷含量測定的常用方法之一。<

8、br>　　2.以脂肪乳為載體制備黃芩苷滴眼液
　　①脂肪乳滴眼液的制備
　　采用單因素考察了影響體系穩(wěn)定性、粒度分布、載藥量和包封率的處方因素。最終確定以注射用大豆油、Poloxamer188、丙三醇等生物相容性好、刺激性低的輔料制備黃芩苷脂肪乳滴眼液。所制備的滴眼液中黃芩苷的含量為1.31±0.01 mg·mL-1，粒徑、PDI和ζ電位分別為107.3±4.39 nm、PDI為0.089±0.044和-(26.29±1.6

9、5) mV。
　?、谥救榈窝垡旱谋碚?br>　　黃芩苷脂肪乳滴眼液為新型制劑，為了對處方中脂質(zhì)材料的加入進行研究，實驗中制備了不含脂質(zhì)材料的O/W亞微乳劑作為參照，對二者進行表征。以外觀、性狀、載藥能力、粒徑分布范圍和穩(wěn)定性等為指標，采用透射電鏡、納米粒度/ζ電位分析儀等手段對兩種制劑進行表征。結(jié)果表明按上述制備方法項下制得的脂肪乳滴眼液外觀呈淡黃色、表面無油花、放置未出現(xiàn)黏壁現(xiàn)象;以適量水稀釋后滴眼液呈淡藍色乳光。采用透射電鏡

10、對二者整體形貌、乳滴的分布及聚集情況進行觀察，結(jié)果表明，顆粒分布較為均勻，無明顯黏連現(xiàn)象，脂肪乳為載體制備的滴眼液乳滴有類似于殼狀結(jié)構(gòu)將黃芩苷藥物包載。采用強光、高溫等破壞條件對黃芩苷不同制劑的穩(wěn)定性進行考察，結(jié)果表明經(jīng)4℃留樣9個月，結(jié)果表明O/W亞微乳對黃芩苷穩(wěn)定性的改變意義不大，而脂肪乳滴眼液中黃芩苷含量、粒徑等均無明顯變化。
　　3.角膜透過性評價
　　磷脂的雙親性能夠通過角膜中水溶性物質(zhì)屏障和脂溶性物質(zhì)屏障，增加藥

11、物的角膜透過性。但影響藥物角膜透過與處方及制備因素有關(guān)，角膜可供吸收的面積、厚度以及藥物經(jīng)膜孔道作用等生理因素有關(guān)，還與處方中促滲劑的種類及用量相關(guān)。本研究在脂肪乳的基礎(chǔ)上，考察促滲劑加入對角膜透過性的影響。
　　①新型促滲劑對角膜透過性的影響
　　采用立式Franz擴散池法，以黃芩苷水溶液為對照考察了Labrasol和TranscutolP兩種促滲劑對不同制劑角膜透過性的機制進行研究。結(jié)果表明，黃芩苷在Transcutol

12、 P中的溶解度較Labrasol好，且在水溶液中直接加入Labrasol，水化值超過83％，表明實驗過程中Labrasol已對角膜上皮細胞和內(nèi)皮細胞造成損傷。黃芩苷的表觀滲透系數(shù)隨著Transcutol P濃度增加，水溶液中呈現(xiàn)升高的趨勢，而亞微乳中并未呈升高的趨勢。
　?、陔x體角膜透過性評價
　　采用離體角膜法對不同制劑透過性及體外釋放模型進行擬合。結(jié)果表明:Transcutol P對黃芩苷O/W亞微乳滴眼液及黃芩苷脂肪乳

13、滴眼液的表觀滲透系數(shù)的改善作用不明顯。當Labrasol的濃度較低時，黃芩苷的表觀滲透系數(shù)隨Labrasol濃度增加而增加，當Labrasol過量存在時，黃芩苷的表觀滲透系數(shù)隨Labrasol濃度的增加而不再增加，達到平衡。體外釋放擬合結(jié)果顯示，黃芩苷在O/W型亞微乳滴眼液中較接近一級釋放模型方程，而在脂肪乳滴眼液中黃芩苷的釋放更接近Higuchi和Riger-Peppas方程。近一步說明黃芩苷在亞微乳中不同相分布可改變其釋放模型。

14、r>　　4.眼內(nèi)分布及刺激性評價
　?、俨煌S芩苷制劑在眼內(nèi)的分布
　　以家兔為實驗對象，摘取眼球分離各組織。對黃芩苷在眼內(nèi)不同組織中的藥物分布進行研究。結(jié)果表明，黃芩苷O/W亞微乳滴眼液和黃芩苷脂肪乳滴眼液可以顯著延長黃芩苷在眼內(nèi)的循環(huán)時間，提高除晶狀體之外眼部組織中的藥物濃度，脂肪乳組滴眼液和亞微乳組滴眼液的濃度分別為水溶液滴眼液的26.2倍和7.8倍，在0.5h時角膜中的藥物分布分別為16.67倍和7.37倍。在8h時

15、脂肪乳滴眼液組在鞏膜中的藥物滯留量為(1.365±0.102)μg·g-1，與亞微乳組相比提高了8.32倍，相當于水溶液滴眼液最高濃度的77％。在眼后段玻璃體組織中，脂肪乳組中藥物最高滯留量濃度由水溶液組中的0.5h(0.412±0.021)μg·g-1延遲出現(xiàn)至2h(2.337±0.238)μg·g-1，但在脂肪乳組中并未能延長釋放時間。實驗結(jié)果也表明，無論是亞微乳組還是脂肪乳組對于眼后段晶狀體中藥物的分布改善作用不明顯。
　　

16、②在體刺激性評價
　　以乳酸林格溶液為對照，采用同體對照法對不同制劑的眼部刺激性進行評價。結(jié)果表明，亞微乳組或脂肪乳組經(jīng)滴眼給藥后眼部刺激性實驗，按照Draize眼部刺激性評價標準，均未產(chǎn)生刺激性，其角膜、結(jié)膜和虹膜睫狀體均無變化，所制備的制劑眼部無刺激性。
　　5.藥物動力學(xué)評價
　?、贉I液消除動力學(xué)
　　采用淚液采集法對黃芩苷眼前段消除動力學(xué)進行評價，黃芩苷不同制劑在眼部各組織中的藥物濃度隨時間變化情況結(jié)果表

17、明:與不含乳化劑的水溶液滴眼液組相比，乳化劑的存在能使藥物以較快速度濃集于組織部位，而脂質(zhì)材料的存在能夠明顯改善角膜對藥物的吸收能力。將藥物在角膜中的藥物濃度由不含乳化劑水溶液組中的滯留量由(0.135±0.017)μg·g-1增加到含乳化劑O/W亞微乳滴眼液組的（0.995±0.045）μg·g-1，而脂肪乳中可達（2.251±0.020）μg·g-1?？梢?，給藥體系中處方的組成決定了藥物的吸收，制備成亞微乳劑增加了黃芩苷的角膜吸收，

18、但載體材料中含有脂質(zhì)材料可使藥物釋放的速率減慢，延長藥效起到緩釋作用。結(jié)合鞏膜中藥物的滯留量，可證實O/W亞微乳組和脂肪乳組的釋放在0～2h前呈突釋效應(yīng)，藥物濃度隨著時間的變化呈現(xiàn)緩慢下降的趨勢。原因與脂肪乳中跨細胞的轉(zhuǎn)運方式有關(guān)，而體系中含脂質(zhì)材料時主要依靠網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用完成轉(zhuǎn)運，而以乳化劑存在的O/W亞微乳劑則以被動擴散轉(zhuǎn)運的方式有關(guān)。脂肪乳中與O/W亞微乳劑所含成分主要差別在磷脂，該成分是組成生物膜的主要成分，滴眼后既能較

19、好的與淚液相融合，并能減少亞微乳中表面活性劑的使用量，增加了角膜透過量減少了眼部刺激性的發(fā)生，但其毒性反應(yīng)仍待進一步研究。
　?、诜克畠?nèi)動力學(xué)
　　采用角膜穿刺法對不同劑型在房水中的藥物動力學(xué)進行研究。結(jié)果表明，黃芩苷亞微乳、脂肪乳均可提高角膜滯留量，降低眼前段淚液對藥物的稀釋，與水溶液相比，亞微乳AUC提高了5.89倍，脂肪乳AUC較亞微乳提高了2.92倍。MRT與水溶液相比，亞微乳提高了近1.05倍，脂肪乳較亞微乳提高了

20、1.18倍，黃芩苷脂肪乳的制備，改善了藥物在角膜前的生物黏附性，同時，脂質(zhì)乳滴也為藥物向角膜內(nèi)有效傳遞提供了動力。房水內(nèi)藥動學(xué)結(jié)果表明，亞微乳及脂肪乳改變了水溶液滴眼液的眼內(nèi)藥物動力學(xué)，t1/2亞微乳與脂肪乳分別較水溶液提高了近3倍。
　?、畚⑼肝鋈蛹夹g(shù)在眼部應(yīng)用的探索
　　探索研究了微透析取樣技術(shù)在眼部藥物濃度測定中的可行性，通過對影響探針回收率的針類型、灌流液組分、灌流液速度、周圍液濃度、溫度等因素進行考察。不同因素的

21、改變雖然對方法回收率均未得到改善，但該結(jié)果可為黃芩苷等低滲透性成分的體內(nèi)回收率測定及體內(nèi)藥動學(xué)研究提供實驗基礎(chǔ)，同時也可為其它性質(zhì)的藥物的回收率的改善提供參考。
　　通過對黃芩苷亞微乳的處方因素考察、制備工藝篩選、制劑表征、穩(wěn)定性、眼部刺激性考察、眼球組織分布、眼前段淚液消除、房水內(nèi)藥物動力學(xué)的研究，表明以脂肪乳為載體的黃芩苷滴眼液更適合眼部用藥。
　　脂肪乳作為眼部給藥載體具有以下優(yōu)點:
　　(1)能增加難溶性藥物溶