脂肪乳救治布比卡因心臟毒性的作用和抗凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、布比卡因是臨床上常用的長(zhǎng)效酰胺類局部麻醉藥，當(dāng)血漿藥物濃度迅速上升超過機(jī)體耐受能力的時(shí)候，就易出現(xiàn)心血管毒性和中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性。實(shí)驗(yàn)研究及臨床個(gè)案報(bào)道已經(jīng)證實(shí)脂肪乳劑（lipid emulsion，LE）具有救治布比卡因心臟毒性的作用。但關(guān)于LE救治布比卡因所致心臟毒性時(shí)聯(lián)合腎上腺素的合適劑量尚存在較大爭(zhēng)議，本實(shí)驗(yàn)第一部分?jǐn)M通過建立新西蘭大白兔的心臟毒性模型，并比較LE聯(lián)合不同劑量腎上腺素的復(fù)蘇效果，為臨床用藥提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前已經(jīng)

2、證實(shí)布比卡因在體內(nèi)、體外均有促細(xì)胞凋亡作用，本實(shí)驗(yàn)第二部分?jǐn)M從細(xì)胞水平，應(yīng)用H9c2心肌細(xì)胞離體培養(yǎng)，通過細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，觀察LE與布比卡因處理24h后對(duì)H9c2細(xì)胞的影響，驗(yàn)證LE是否具有心肌細(xì)胞保護(hù)作用，為L(zhǎng)E防治布比卡因心臟毒性提出新的假說及其實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述。
　　第一部分脂肪乳劑救治布比卡因致兔心臟毒性的作用
　　實(shí)驗(yàn)1持續(xù)泵注布比卡因致新西蘭大白兔心臟毒性模型的制備
　　目的：通過持

3、續(xù)泵注布比卡因建立新西蘭大白兔心臟毒性模型。
　　方法：健康成年的新西蘭大白兔14只，在耳緣靜脈留置套管針后麻醉行氣管切開機(jī)械通氣、頸動(dòng)脈置管術(shù)。數(shù)字表法隨機(jī)分為兩組，每組7只：生理鹽水組（C組）和脂肪乳組（L組）。有創(chuàng)操作完成后，穩(wěn)定30min，并標(biāo)記為 T0時(shí)間點(diǎn)，采動(dòng)脈血行血?dú)夥治龊蟪掷m(xù)泵注鹽酸布比卡因1.5mg·(kg·min)-1直到兔心率<60次/min同時(shí)伴平均動(dòng)脈壓<20mmHg，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)并維持10s后開始行心肺復(fù)

4、蘇。L組給予20％脂肪乳注射液3mL·kg-1，并以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。C組給予生理鹽水3mL·kg-1，后以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。持續(xù)監(jiān)測(cè)ECG和有創(chuàng)動(dòng)脈血壓，并記錄心肺復(fù)蘇開始后第5、10、15、20min時(shí)（記為T1、T2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)）的相應(yīng)數(shù)值。T4時(shí)復(fù)查動(dòng)脈血?dú)夥治觥?br>　　結(jié)果：兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在T1、T2、T3、T4四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上MAP、HR數(shù)值均低于 T0基礎(chǔ)值，

5、同時(shí)L組數(shù)值高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。T4時(shí)，C組的pH值、PaO2數(shù)值低于L組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），L組的乳酸值、PaCO2數(shù)值低于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：持續(xù)泵注鹽酸布比卡因制造新西蘭大白兔心臟毒性模型建立成功。在此模型下脂肪乳劑的救治效果要優(yōu)于生理鹽水。
　　實(shí)驗(yàn)2脂肪乳聯(lián)合不同劑量腎上腺素在救治布比卡因致兔心臟毒性中的作用
　　目的：比較脂肪乳聯(lián)

6、合不同劑量腎上腺素在布比卡因所致兔心臟毒性中的救治效果。
　　方法：健康成年的新西蘭大白兔35只，在耳緣靜脈留置套管針后麻醉行氣管切開機(jī)械通氣、頸動(dòng)脈置管術(shù)。采用數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，每組7只：生理鹽水對(duì)照組（C組），脂肪乳組（L組），脂肪乳聯(lián)合腎上腺素5、25、50μg·k g-1組（L5、L25、L50組）。有創(chuàng)操作完成后，穩(wěn)定30min，并標(biāo)記為T0時(shí)間點(diǎn)，采動(dòng)脈血行血?dú)夥治龊蟪掷m(xù)泵注鹽酸布比卡因1.5mg·(kg·min)

7、-1直到兔心率<60次/min同時(shí)伴平均動(dòng)脈壓<20mmHg，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)并維持10s后開始行心肺復(fù)蘇。L組給予20%脂肪乳注射液3mL·kg-1，并以0.5mL·(k g·min)-1的速度持續(xù)泵注，在L5、L25、L50組在給予上述劑量脂肪乳后再分別給予腎上腺素5、25、50μg·kg-1單次靜脈注射。C組給予生理鹽水3mL·kg-1，后以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。持續(xù)監(jiān)測(cè)ECG和有創(chuàng)動(dòng)脈血壓。記錄在心肺復(fù)蘇開始后

8、第5、10、15、20min時(shí)（記為T1、T2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)）恢復(fù)自主循環(huán)的動(dòng)物數(shù)量。
　　結(jié)果：T1時(shí)，L5組、L25組、L50組MAP值高于C組和L組（P<0.05），L25組、L50組M AP值高于L5組，L50組高于L25組（P均<0.05）；T2時(shí)，C組低于其余四組， L25組高于L5組（P均<0.05）；T3和T4時(shí)，L組、L5組、L25組M AP值高于C組（P均<0.05）；T4時(shí)，L25組高于 L50組（P<0

9、.05）。T1時(shí)，L25組和L50組 HR值高于C組、L組、L5組（P均<0.05）；T2時(shí)，L25組和L50組HR值高于C組（P均<0.05）；T3和T4時(shí)，L組、L5組、L25組、L50組HR值高于C組（P均<0.05）；T4時(shí)，L25組高于L50組（P<0.05）。QRS間期、PR間期在T4時(shí)，C組均高于其他四組（P均<0.05）；T4時(shí)的C組、L組、L50組均高于T0基礎(chǔ)值（P均<0.05）。4個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組恢復(fù)自主循環(huán)的動(dòng)物數(shù)量

10、分別為：T1時(shí)，C組0只、L組0只、L5組1只、L25組7只、L50組7只；T2時(shí)C組0只、L組1只、L5組0只、L25組3只、L50組2只；T3時(shí)C組0只、L組1只、L5組1只、L25組3只、L50組1只；T4時(shí)，C組0只、L組2只、L5組3只、L25組5只、L50組1只。
　　結(jié)論：脂肪乳劑聯(lián)合25μg·k g-1腎上腺素在救治布比卡因所致新西蘭大白兔心臟毒性的效果顯著。
　　第二部分脂肪乳劑及布比卡因?qū)9c2心肌細(xì)胞

11、的作用
　　目的：探討脂肪乳注射液對(duì)H9c2心肌細(xì)胞的影響，研究布比卡因?qū)е录?xì)胞凋亡的作用靶點(diǎn)，并觀察脂肪乳聯(lián)合布比卡因處理下對(duì)H9c2細(xì)胞的作用。
　　方法：H9c2心肌細(xì)胞離體培養(yǎng)，隨機(jī)分為四組：給予完全培養(yǎng)基加細(xì)胞的空白對(duì)照組（Control組）；給予濃度為1.03mmo l/L布比卡因處理24h的Bup組；濃度為2%脂肪乳注射液處理24h的LE組；1.03mmol/L布比卡因+2%脂肪乳注射液處理的LE+Bup組。各

12、組細(xì)胞均在給予相應(yīng)藥物后繼續(xù)孵育24h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，F(xiàn)CM檢測(cè)凋亡率，JC-1檢測(cè)線粒體膜電位，Western blot法檢測(cè)CleavedCaspase-3和Caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡率、紅熒光與綠熒光比值及Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平、Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值在不同處理組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=78.460；F=227.108

13、；F=173.471；F=164.346；F=165.463；P均<0.01）。細(xì)胞存活率在Bup組低于其余三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；LE+Bup組低于Control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），高于Bup組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。細(xì)胞凋亡率在Bup組高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；LE組與Control組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；LE+Bup組高于Control組、LE組，

14、低于Bup組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。紅熒光與綠熒光比值在Bup組為0.32±0.03，低于Co ntro l組（0.96±0.65）（P<0.01），而LE+Bup組（0.46±0.04）高于Bup組（P<0.01）。Western blot結(jié)果顯示，四個(gè)處理組Caspase-3蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平在Bup組高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01