基于多肽結(jié)構(gòu)的HDAC小分子配體的合成.pdf

1、賴氨酸的?；揎検堑鞍妆磉_(dá)后修飾的形式之一，由組蛋白去乙?；福℉DACs）與組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶（HATs）協(xié)同調(diào)控。本論文探討了含有AMC熒光團(tuán)的HDAC多肽配體分子的新合成策略及其在化學(xué)生物學(xué)研究中的應(yīng)用。
　　含有熒光基團(tuán) AMC底物多肽化合物是酶學(xué)研究和化學(xué)生物學(xué)研究常用的探針?lè)肿?。由于該?lèi)多肽化合物的C端被AMC占據(jù)，因而，傳統(tǒng)的合成策略，其最終的組裝步驟通常需要在液相中完成。我們建立了一個(gè)新策略以合成Ac-P-2-P

2、-1-Lys（Ac）-AMC多肽：在 Lys（Ac）片段的乙?；撂荚由吓R時(shí)引入巰基，從而能直接地通過(guò)固相合成得到目標(biāo)多肽化合物。在構(gòu)建相關(guān)組合肽庫(kù)時(shí)，該新方法的高效性優(yōu)勢(shì)尤為突出。
　　自然界中，Lys側(cè)鏈的?；揎椈鶊F(tuán)除常見(jiàn)的乙酰基外，還包括丙?；?、丁酰基等低豐度修飾方式。根據(jù)文獻(xiàn)中的結(jié)構(gòu)生物學(xué)結(jié)果，我們猜想：HDAC酶活中心的GGXHH模體（motif）中，X殘基的側(cè)鏈的大小可能是影響HDAC的?；x擇性的決定性因素之一。

3、我們合成了四個(gè)含有 AMC熒光底物多肽，分別含有乙酰，丙酰，異丁酰和丁酰修飾的 Lys；另一方面，通過(guò)定點(diǎn)突變，表達(dá)了四個(gè)突變的HDAC8蛋白，分別將野生型中位于X位置的Trp殘基突變?yōu)檩^小的Phe，His，Ala和Gly殘基。我們發(fā)現(xiàn)：野生型HDAC8對(duì)丁?；孜锏幕钚詷O弱，對(duì)乙?；孜锘钚院軓?qiáng)，但是Phe和His突變蛋白的情形正好相反。該實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了我們的假設(shè)。同時(shí)，由于突變GGXHH模體中的X殘基而得到的突變 HDAC蛋白可以改