一株苝醌類(lèi)光敏劑產(chǎn)生菌的rRNA基因ITS測(cè)序分析及液體深層發(fā)酵工藝研究.pdf

1、中國(guó)學(xué)者陳遠(yuǎn)騰等于20世紀(jì)90年代,自云南省西北部山區(qū)采集到的樣本中分離到一株次生代謝產(chǎn)物為苝醌衍生物(Perylenequinonoid derivatives,PQD)的絲狀真菌.云南大學(xué)楊發(fā)奎教授經(jīng)初步鑒定,將其歸為子囊菌綱肉座目肉座菌科菌寄生菌屬(Ascomycetes Hypocreales Hypocreaceae Hypomyces(Fr.)Tul.sp.).該研究克隆了該真菌一個(gè)代號(hào)為AL18菌株的rRNA基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄區(qū)間

2、(internal transcribed spacer,ITS)并測(cè)序.將測(cè)序結(jié)果在GenBank中發(fā)表,登錄號(hào)為AY425966.在GenBank中對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行了Blast序列比對(duì),并利用DNAstar將該菌株與竹黃屬和菌寄生菌屬進(jìn)行了多重序列比對(duì).Blast序列比對(duì)結(jié)果為,該實(shí)驗(yàn)所研究菌株AL18與竹黃屬(shiraia)的ITS序列相似度達(dá)92﹪.多重序列比對(duì)結(jié)果顯示,AL18與竹黃屬(shiraia)可在96﹪的水平上聚為一

3、類(lèi),表明該菌株與竹黃屬(shiraia)的親緣關(guān)系較近;而AL18與菌寄生菌屬(Hypomyces)在74.1﹪水平上聚為一類(lèi),提示兩者的親緣關(guān)系較遠(yuǎn),該菌株應(yīng)不屬于菌寄生菌屬.采用單因素實(shí)驗(yàn)法對(duì)這株產(chǎn)PQD絲狀真菌的搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行了研究,確定了其發(fā)酵條件為接種種齡40h,接種量7.5﹪,搖床轉(zhuǎn)速180r/min,培養(yǎng)溫度為30℃,250ml三角瓶裝液量40ml,初始pH5.75.在上述培養(yǎng)條件下,采用單因素實(shí)驗(yàn)法分別進(jìn)行了碳源篩選試

4、驗(yàn)、氮源篩選試驗(yàn),并考察了多種無(wú)機(jī)鹽和微量元素對(duì)PQD產(chǎn)量的影響.采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),選用L<,9>(3<'4>)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)中篩選出的綿白糖、蛋白胨、蠶蛹粉、硫酸銅進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化,優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:200g去皮馬鈴薯煮沸15min,4層紗布過(guò)濾取汁,綿白糖30g,蠶蛹粉12.5g,蛋白胨3g,磷酸二氫鉀1g,硫酸鎂0.5g,硫酸銅0.05g,用自來(lái)水補(bǔ)足至1000ml,pH5.75,121℃滅菌20min.對(duì)此培養(yǎng)基進(jìn)行了