45501.一株苝醌類光敏劑產生菌al18的cdna文庫的構建_第1頁
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文檔簡介

1、VS5913ZL^，分類號盟i￡翌四川農業(yè)大學碩士學位論文一株菲醌類光敏劑產生菌ALl8的cDNA文庫的構建張亞南指導教師曾憲垠研究員學科專業(yè)研究方向張紅雨教授(山東理工大學)生物物理學分子生物物理2006年6月ConstructionofcDNALibraryofaFungusProducingPerylenequinonoidDerivativesPhotosensitizerZhangYa—nan(Biophysics)Direc

2、tedbyProfZengXianyinandProfZhangHongyuThisworkusesafimgusALl8producingPerylenequinonoidderivativesphotosensitizerwhichwaspickedfromthemountainousareaatthewesternpartofYunnanOnthebasisofestablishingthemethodoftotalRNAextr

3、action，theeDNAlibraryiSconstructedThemainresultsareasfollows：1InordertogetovertheproblemthatRNAiseasytOdegradeandtherearealotofRNaseandglucideinthisfungusOnthebasisofconsultingmanymethodsoftotalRNAextraction，themethodise

4、stablishedbyexperimentfortotalRNAextractionusingguanidiniumisothiocyanteandDmercaptoethanolfordenaturation，thenusingwater—saturedphenol，chloroformandisoamylalcoholeforextraction，RNAstayinwater，whileDNAandproteinstayinano

5、thermediumFinally，RNAisdepositedbyisopropyIaIcoho】TheintegrityandpurificationofthetotalRNAisolatedareeligibleandmeettherequirementtoconstructeDNAlibrary2ThecDNAissynthesizedfromthetotalRNAwiththeonepointmutantofMoloneymu

6、rineleukemiavirus(MMLV)reversetranscriptase，andtheeDNAisfurthersize—fractionedbyCHROMASPIN一400Columntoremovethefractionshorterthan500bpThedscDNAisclonedintotheATriplEx2vectorandtheresultingligatingmatarialiskphagepackage

7、dTheunamplifedcDNAlibraryistiteredusingEcoliXL—Blue，anditturnsoutthatthetiteroftheeDNAlibraryisl04x106pfu／ml，thetiteroftheamplifiedcDNAlibraryisl32x10”pfu／ml，andtherecombinantefficiencyis82％throughwhite／bluescreeningItis

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