日本血吸蟲Wnt受體蛋白sjFz5和sjFz7編碼基因的克隆及其生物功能分析.pdf

1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文日本血吸蟲Wnt受體蛋白sjFz5和sjFz7編碼基因的克隆及其生物功能分析姓名：韓琳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物學(xué)指導(dǎo)教師：馮新港20080501A b s t r a c tS c h i s t o s o m i a s i s d u e t oi n f e c t i o no f s c h i s t o s o m a , w i l lb eb r i n gs e r i o u s h

2、e a l t h yp r o b l e m t ob o t hh u m a n a n d a n i m a l s ．S c h i s t o s o m ap r e s e n t s d i f f e r e n t i a lg e n ee x p r e s s i o np a t t e r nd u r i n gd i f f e r e n t d e v e l o p m e n t a l

3、s t a g e so f l i f e c y c l e ，w h i c hr e s u l t si nt r a n s p a r e n tc h a n g e s i n i t s b i o l o g y a n dm o r p h o l o g y , m u l t i p l e s t y l ew i t hv a r i o u si m m u n e e s c a p em e c h

4、 a n i s m ．W n t p r o t e i n t o g e t h e rw i t hi t sF r i z z l e dr e c e p t o r s ，a f a m i l yo f s e v e n t r a n s m e m b r a n e d o m a i np r o t e i n s ，i na d d i t i o nas e r i e so fu p s t r e a

5、 ma n d d o w n s t r e a m s i g n a l i n g ‘m o l e c u l e sf o r m a s e t o f k e y s i g n a lp a t h w a y s ．W n ts i g n a l i n g i si n v o l v e di nv a r i e t yo f d e v e l o p m e n t a l p r o c e s s e

6、 si n c l u d i n g e m b r y o n i c d e v e l o p m e n t , c e l lp o l a r i t y ,c e l lf a t ed e t e r m i n a t i o n ，c e l lp r o l i f e r a t i o n , t i s s u ep a t t e r n i n ga n d c o n t r o lo f ．T u

7、m o r i g e n e s i s ．M e m b e r so f t h eF r i z z l e df a m i l yo f p r o t e i n ss e r v e a sr e c e p t o r sf o rt h eW n t s i g n a l i n gp a t h w a y ．W n t - i n d u c e ds i g n a l i n g v i a1 3 - c

8、a t e n i np l a y sc r u c i a lr o l e si na n i m a ld e v e l o p m e n ta n dt u m o r i g e n e s i s ．W n tp r o t e i n ss i g n a lt h r o u g hs e v e n —p a s s t r a n s m e m b r a n e r e c e p t o r so f t

9、 h ef r i z z l e d f a m i l y t o a c t i v a t eb - c a t e n i nd e p e n d e n t t r a n s c r i p t i o no f t a r g e tg e n e s ．B a s e o n t h i ss t u d yo f W n t 4a n dW n t l 0 ag e n e sa c q u i r e df r

10、o m s c h i s t o s o m a , t w on e w g e n e se n c o d i n gW n t F r i z z l e dp r o t e i n sh a v eb e e n c l o n e d ．B a s e d o nt w o E S T s ( G e n B a n k a c c e s s i o nN O ．A Y 8 0 8 3 5 3 、A Y 8 10 2

11、9 6 ) i d e n t i f i e di nG e n b a n k ,t h ef u l l l e n g t hg e n e o f r e c e p t o r p r o t e i n e n c o d i n gg e n es j F z 5 ( G e n B a n k a c c e s s i o nN O ．E U 3 7 0 9 2 6 )a n ds j F z 7 ( G e n B

12、 a n k a c c e s s i o n N O ．E U 3 7 0 9 2 7 ) w e r e c l o n e d w i t hR A C E t e c h n k i u ef r o m 7 dh e p a t i cs c h i s t o s o m u l u m aa n d4 2 da d u l t , a n a l y z e dt h e i rc o m p l e t eo p e

13、nr e a d i n gf r a m eb yb i o i n f o r m a t i c st o o l s ．s j F z 5c o n t a i n sac o m p l e t eO R F w i t h2 6 0 4n u c l e o t i d e s ，a n d e n c o d i n g ．8 6 7 a m i n oa c i d ，w i t h9 8 ．2 6 4 k D o fm

14、 o l e c u l a rm a s s ．A n dP I 8 ．1 4 ．5 8 a c i d i c a m i n oa c i d a n d 6 7b a s i c a m i n oa c i d ．F o l l o w i n g ，S j F z 7c o n t a i n sac o m p l e t eO R F w i t h2 9 0 7n u c l e o t i d e s ，a n de

15、 n c o d i n g 6 9 8 a m i n oa c i d ，w i t h 7 7 ．5 0 6 l ( Do fm o l e c u l a rm a s s ．A n d P I8 ．15 ．5 3 a c i d i ca m i n oa c i da n d6 2b a s i ca m i n oa c i d ．S i g n a l P e p t i d e a n a l y s i ss h o

16、 w e dt h a ts j F z 5h a d2 3a m i n oa c i d p e p t i d e ，s j F z 7h a s2 0a m i n oa c i dp e p t i d e ，w h i c hw e r e a l l s e c r e t e d p r o t e i n s ．T r a n s m e m b r a n ed o m a i n p r e d i c t i o

17、 nt e s t i f i e d t h e ya l lh a ds e v e n —p a s s t r a n s m e m b r a n e c h a r a c t e r i s t i c s ．H y d r o p h o b i c i t y a n d A n t i g e n p e p t i d e a n a l y s i sd e m o n s t r a t e d t h e

18、i r H y d r o p h o b i c i t yw e r eb e t t e r , a n d p o s s e s s i n g m o r e a n t i g e n s i t e s ．A n a l y s i it h r o u g hb i o i n f o r m a t i c st o o l ss h o w e d t h a tt h i st w o g e n e sh a

19、dt y p i c a lc h a r a c t e r i s t i c so f W n tf r i z z l e df a m i l yp r o t e i n ．T o a n a l y z es j F z 5 a n ds j F z 7 ，sd i f f e r e n t i a le x p r e s s i o nd u r i n gd i f f e r e n td e v e l o p

20、 m e n t a ls t a g e sa p p l y i n gR e a l - t i m ef l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v eP C R t e c h n i q u e ，r e s u l t s s h o w e dt h e m R N A l e v e l o ft h i st w og e n e sw e r ea l l t h eh i

21、【g h e s t i n t h el8 ds c h i s t o s o m u l u m ．p r e s u m e dt h a t t h i st w og e n e sp l a y e dk e y r o l e sd u r i n gs c h i s t o s o m u l u m a d e v e l o p m e n t ．T h e ym a y b ec r u c i a lr e

22、g u l a t o r yf a c t o r s t os c h i s t o s o m a lg r o w t ha n d d e v e l o p m e n t ．A sf o rs j F z 5 ，n oe x p r e s s i o nw a s o b s e r v e d i n4 2 df e m a l ew o r m s ，t oe x p l a i nt h a t t h i sg

23、 e n e p r e s e n t e d d i f f e r e n t i a le x p r e s s i o na c c o r d i n gt od i f f e r e n t g e n d e r ．I tw a s p o s s i b l et h a ts j F z 5h a di m p o r t a n t s i g n i f i c a n c ei nm a i n t a i

24、 n i n g m a l ew o r m ，s t r a i t s ．T h e s j F z 5a n ds j F z 7c D N A f r a g m e n t sf r o m t h e i re x t r a c e l l u l a rd o m a i n , A l s ok n o w n a st h eC R D ( c y s t e i n er i c hd o m a i n ) ，

25、 c o n t a i n i n g1 0c o n s e r v e dc y s t e i n e s ，w e r e s u b c l o n e di n t oa m o d i f i e de x p r e s s i o nv e c t o rp R K 5 - F z l C R D f r o m D r ．R o e lN u s s ei nH o w a r d H u g h e sM e d

26、 i c a lI n s t i t u t ea n ds u c c e s s f u l l y c o n s t r u c t e de u k a r y o t i ce x p r e s s i o n v e c t o r sa sp R K 5 - F z l C R D —F z 5 和p R K 5 - F z l C R D- F z 7 ．F u r t h e rr e s e a r c h e

27、 so ne u r o r y o t i ce x p r e s s i o no fs j F z 5a n ds j F z 7w i l la s s i s t u st ou n d e r s t a n dm o r e a b o u t t h e i n t e r a c t i o nb e t w e e n W n t p r o t e i n sf r o m m a m m a l i a n c