番茄高頻轉化體系的建立及RNAi載體構建的研究.pdf

1、番茄作為一種重要的蔬果作物，是世界上重要的食用經濟作物之一。番茄黃化曲葉病毒(Tomatoyellow leaf curl virus，TYLCV)是雙生病毒科菜豆金色花葉病毒屬，通過煙粉虱來傳播，其引起的病毒會導致番茄大規(guī)模的減產，同樣給予菜農經濟上的損失。控制番茄黃化曲葉病毒病的有效方法是培養(yǎng)新的抗病毒品種。集高效性、可遺傳性、特異性和生物安全性于一身的RNAi技術成為了抗病育種的有效方法之一。
　　 本研究通過選取TYLC

2、V病毒基因組上的保守基因片段V1，驗證其轉基因番茄對病毒的抗性。將V1片段以正反兩向連接pFGC5941載體中內含子兩端，構建RNAi載體pFGC5941-V1B-V1A。
　　 將RNAi載體pFGC5941-V1B-V1A的RNAi轉化到農桿菌GV3101中，留作農桿菌侵染實驗。用攜帶pFGC5941-V1B-V1A的RNAi載體的農桿菌來侵染處于2-3葉期的番茄幼苗;20d后，用農桿菌介導法通過攜帶TYLCV全基因組的質粒

3、來侵染番茄植株，通過觀察番茄植株發(fā)病癥狀態(tài)和對其病毒DNA的擴增，檢測片段V1的抗病效果。顯示結果為，片段V1可以引起siRNA的機制，遏制或削弱番茄植株中TYLCV基因的積累。
　　 在番茄愈傷組織培育過程中，子葉誘導愈傷和不定芽發(fā)生的效果最好，其最適培養(yǎng)基為MS+0.2 mg/L IAA+1.0 mg/L6-BA，最適生根培養(yǎng)基為MS+0.1 mg/L IAA;通過實驗數(shù)據(jù)比較，農桿菌介導轉化番茄的最適侵染時間為20 min