敵敵畏脅迫下深綠木霉(Trichoderma atroviride)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)與功能分析.pdf

1、木霉菌對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的耐受性是其生物降解農(nóng)藥殘留的重要前提，因此，研究ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在木霉菌耐受敵敵畏中的作用具有重要意義。
　　利用RNA-seq轉(zhuǎn)錄組分析對(duì)深綠木霉T23中敵敵畏耐受相關(guān)基因進(jìn)行挖掘，共得到5382個(gè)差異表達(dá)基因，從中鑒定出137個(gè)hex1調(diào)控下的敵敵畏脅迫應(yīng)答基因，其中25個(gè)基因參與轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。KEGG代謝通路分析表明ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在敵敵畏耐受中起到重要作用。通過(guò)保守區(qū)域BLAST，在深綠木霉基因組中檢索到31個(gè)

2、耐藥相關(guān)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，根據(jù)轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果與基因功能注釋從中篩選7個(gè)進(jìn)行表達(dá)分析。
　　采用熒光定量方法分析了加入敵敵畏脅迫0h、2h、6h和24h后，深綠木霉中7個(gè)候選ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)PDR、MRP、MDR三個(gè)亞家族中各自具有類似的表達(dá)變化趨勢(shì)，其中一個(gè)PDR型基因在6 h的表達(dá)量上調(diào)3000倍以上，命名為T(mén)aPdr2；同樣地，分析了深綠木霉T23、?hex1以及hex1回補(bǔ)株中，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的表達(dá)差

3、異，發(fā)現(xiàn)hex1敲除后的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，而敵敵畏脅迫加入后，表達(dá)量顯著降低。
　　采用兼并引物同源克隆在深綠木霉T23基因組中擴(kuò)增得到TaPdr2與TaMrp1基因并測(cè)序其全長(zhǎng)序列，分析了TaPdr2與TaMrp1的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)并對(duì)其蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)。TaPdr2轉(zhuǎn)錄本具有315bp的3’端UTR序列，與PDR5以及CDR轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞家族有很高同源性，TaPDR2與TaMRP1蛋白都位于細(xì)胞膜。
　　采用ATMT介