4-HPR微泡聯(lián)合超聲治療對(duì)裸鼠瘢痕疙瘩作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討4-HPR微泡聯(lián)合超聲治療的裸鼠瘢痕疙瘩模型中TGF-β/Smads通路的作用。
　　方法：
　　1.包載4-HPR的膠束和微泡的制備：使用聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及罚≒EG-DSPE）和蛋黃磷脂酰膽堿（EPC），應(yīng)用成膜-水化法制備包載4-HPR的膠束，加十二氟戊烷（PFP），應(yīng)用細(xì)胞超聲破碎儀行超聲，從而制備出包載4-HPR的微泡。
　　2.4-HPR微泡聯(lián)合超聲治療的裸鼠瘢痕疙瘩模型：將傳代培養(yǎng)的

2、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞（濃度為5×107/ml）懸浮于細(xì)胞基底膜基質(zhì)膠溶液中，接種到裸鼠右側(cè)腋窩皮下組織，建立裸鼠瘢痕疙瘩模型。動(dòng)物模型建立后，裸鼠隨機(jī)分為三組，即生理鹽水組、4-HPR組及4-HPR微泡組。生理鹽水組僅給予0.1ml生理鹽水溶液；4-HPR組給予4-HPR溶液0.1ml（給藥劑量為12.5mg/kg，以4-HPR計(jì)算）；4-HPR微泡組給予12.5mg/kg4-HPR微泡溶液0.1ml后，局部給予超聲照射

3、（頻率3MHZ、功率2W/cm2、周期20％、時(shí)間1min）。4-HPR微泡是成膜-水化法包載4-HPR制備的微泡。每組裸鼠均在瘤體體積生長(zhǎng)至約100-200mm3時(shí)開始給藥，給藥方式為瘤體內(nèi)局部注射，隔日給藥一次，共給藥10次。末次給藥48h后向裸鼠尾靜脈內(nèi)推注空氣處死所有裸鼠，取出裸鼠瘤組織、心、肝、脾、肺及腎組織行蘇木素-伊紅染色，觀察組織病理學(xué)改變。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)裸鼠瘤組織中TGF-β1、Smad2、Smad3、Sma

4、d4及Smad7蛋白的表達(dá)變化，與人瘢痕疙瘩組織比較。
　　結(jié)果：免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)裸鼠生理鹽水組瘤組織中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表達(dá)增強(qiáng)，而Smad7蛋白表達(dá)降低，與人體瘢痕疙瘩組織中的蛋白表達(dá)相一致。而裸鼠4-HPR組和微泡組瘤組織中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表達(dá)均減弱，而Smad7蛋白則表達(dá)增強(qiáng)。雖然微泡組Smad7蛋白表達(dá)比4-HPR組更強(qiáng)，但兩組之間統(tǒng)計(jì)無顯

5、著性差異。蘇木素-伊紅染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)裸鼠生理鹽水組的瘤組織成纖維細(xì)胞疊加多，呈無極性排列，與人瘢痕疙瘩組織的病理改變相一致。4-HPR組成纖維細(xì)胞減少、排列無極性、疊加減少。4-HPR微泡組成纖維細(xì)胞明顯減少、有序排列、無疊加。裸鼠的心、肝、脾、肺及腎組織均無組織病理學(xué)改變。
　　結(jié)論：
　　1.4-HPR通過降低TGF-β/Smads通路中的TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4蛋白表達(dá)來抑制瘢痕疙瘩的生長(zhǎng)。