包載4-羥苯基維胺的微泡聯(lián)合超聲對瘢痕疙瘩的治療作用.pdf

1、目的：制備包載4-羥苯基維胺（4-HPR）的微泡，并對其進(jìn)行粒徑、載藥量、包封率的測量；探討4-HPR微泡聯(lián)合超聲對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖抑制作用和裸鼠瘢痕疙瘩模型的治療作用。
　　方法：
　　1.4-HPR微泡的制備及載藥研究：以聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及罚≒EG-DSPE）和蛋黃磷脂酰膽堿（EPC）為膜材，利用成膜-水化法制備包載4-HPR的膠束，然后加入十二氟戊烷（PFP），利用細(xì)胞超聲破碎儀超聲后形成微泡。應(yīng)

2、用透射電鏡Hitachi H-7650、ZPW388激光粒度分析儀、高效液相色譜儀對其形態(tài)、粒徑、電位、載藥量、包封率進(jìn)行研究；觀察4-HPR膠束和4-HPR微泡的溶血情況。
　　2.4-HPR溶液、4-HPR微泡聯(lián)合超聲對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞作用的研究：（1）采用MTT法檢測4-HPR溶液、4-HPR膠束、4-HPR微泡和超聲波對人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖抑制作用。（2）利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察4-HPR微泡結(jié)合超聲對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)

3、胞增殖的影響。（3）以香豆素6代替4-HPR制成載藥微泡，結(jié)合超聲波作用，用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞對載藥微泡的藥物攝取情況。
　　3.4-HPR微泡聯(lián)合超聲對瘢痕疙瘩裸鼠動物模型作用的研究：裸鼠皮下接種體外培養(yǎng)的人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞結(jié)合細(xì)胞基底膜基質(zhì)膠（Matrigel）建立動物模型后，瘤體局部分別注射生理鹽水、4-HPR溶液和4-HPR微泡，給藥劑量為12.5mg/kg（以4-HPR計），微泡組藥物注射后立即瘤體局部給予超聲處

4、理（頻率3 MHZ，功率2 W/cm2，刺激周期20％，超聲60 s），定期觀察瘤體大小和裸鼠體重的變化，于末次給藥48 h后處死裸鼠，取各組瘤組織、心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行組織病理學(xué)評價。
　　結(jié)果：
　　1.4-HPR膠束呈球形，載藥量和包封率分別為（14.51±0.13）%和（90.88±0.36）%，平均粒徑為208.9 nm，分散均勻；4-HPR微泡的平均粒徑為150.7 nm，電位為-42.03 mV，分散均勻；4

5、-HPR膠束和4-HPR微泡均無溶血作用。
　　2. MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4-HPR溶液在1-50μmol/L濃度范圍內(nèi)對人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞有增殖抑制作用，且增殖抑制率和藥物濃度呈正相關(guān)。4-HPR微泡結(jié)合超聲能加快藥物入胞和納米粒的釋藥，更好地抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖（P<0.05），藥物在5 min內(nèi)基本全部進(jìn)入細(xì)胞。
　　3.應(yīng)用生理鹽水、4-HPR溶液和4-HPR微泡聯(lián)合超聲對瘢痕疙瘩動物模型治療后發(fā)現(xiàn)，4-H