載 4HPR脂質(zhì)微泡聯(lián)合超聲對(duì)瘢痕疙瘩治療作用的研究.pdf

1、目的：制備載N-（4-羥基苯基）維生素甲酰胺[N-(4-Hydroxyphenyl)retinamide]脂質(zhì)微泡(4HPR loaded Lipid microbubbles，4HPR-LM)，探討其聯(lián)合超聲對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞（Human keloid fibroblasts，HKFs）增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響，以及建立裸鼠皮下瘢痕疙瘩種植瘤模型，考察4HPR-LM聯(lián)合超聲對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
　　方法：通過(guò)薄膜-超聲分散

2、法制備載4HPR脂質(zhì)體（4HPR loaded lipsome，4HPR-L），采用高效液相法（High Performance Liquid Chromatograph，HPLC）、動(dòng)態(tài)光散射法（Dynamic Light Scattering，DLS）、透射電鏡法（Transmission electron microscope，TEM）對(duì)其載藥濃度、粒徑分布、外觀形態(tài)、Zeta電位、載藥量、包封率及30日內(nèi)穩(wěn)定性和滲漏率進(jìn)行考察。

3、以4HPR-L為前體采用超聲空化法制備4HPR-LM。采用細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)（CCK-8）法篩選合適超聲參數(shù)及對(duì)空白脂質(zhì)微泡（Blank-LM）的生物相容性進(jìn)行評(píng)價(jià)，并檢測(cè)游離4HPR、4HPR-L和4HPR-LM聯(lián)合超聲對(duì)HKFs的抑制作用；采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4HPR對(duì)HKFs侵襲能力影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)4HPR對(duì)HKFs的細(xì)胞周期阻滯作用及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況。HKFs接種法建立裸鼠皮下瘢痕疙瘩模型，觀察4HPR-LM聯(lián)合超聲的體內(nèi)

4、抑瘤作用，并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：4HPR-L制備中探頭超聲參數(shù)為15min（功率200W，超聲1s，間歇2s）。
　　（1）制備的4HPR-L載藥濃度達(dá)1400μg/ml以上，粒徑分布為（100.08±1.33）nm，PDI為（0.169±0.005），Zeta電位分布為（﹣34.27±2.27）mV，透射電鏡下顯示4HPR-L為外觀圓整、大小均勻的球形或類(lèi)球形結(jié)構(gòu)，直徑為100nm左右；包封率為（95.8±0.

5、2）％，載藥量為（8.26±0.35）%。4HPR-L（4℃）密封保存30天其外觀、粒徑及電位無(wú)明顯變化，7天、15天、30天滲漏率分別為（2.15±0.27）%，（5.91±2.7）%，（8.3±0.7）%。（2）CCK-8實(shí)驗(yàn)表明單純超聲及Blank-LM對(duì)HKFs增殖無(wú)明顯抑制作用，4HPR、4HPR-L和4HPR-LM聯(lián)合超聲對(duì)HKFs抑制作用均有時(shí)間和劑量依賴(lài)性，且相同濃度下4HPR-LM聯(lián)合超聲抑制作用明顯優(yōu)于4HPR組（P

6、<0.05)；
　?。?）細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明4HPR具有抑制HKFs運(yùn)動(dòng)及侵襲作用；
　?。?）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明4HPR可有效誘導(dǎo)HKFs發(fā)生凋亡并可將細(xì)胞阻滯于G2-M期，且所有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中4HPR-LM聯(lián)合超聲表現(xiàn)出更好作用效果，明顯優(yōu)于游離4HPR。
　?。?）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明4HPR-LM聯(lián)合超聲有明顯的抑瘤作用，治療結(jié)束后瘤重、瘤體積與對(duì)照組相有顯著差異（P<0.05)，實(shí)驗(yàn)期間所有裸鼠狀態(tài)良好，體重?zé)o明顯變化