脂質微泡的制備及應用研究.pdf

1、目的:
　　 1、篩選脂質微泡用磷脂材料、起泡劑和凍干支撐劑,確定脂質微泡處方
　　 2、確定脂質微泡的凍干工藝
　　 3、考察脂質微泡凍干粉的穩(wěn)定性影響因素,確定脂質微泡凍干粉的儲存條件
　　 4、考察脂質微泡的造影效果
　　 5、制備PEG及肝素修飾化的脂質微泡,并對其質量進行考察
　　 6、采用體外和體內試驗,考察鹽酸表柔比星脂質微泡的藥效,并考察不同給藥方式對藥效的影響
　　

2、 方法:
　　 1、應用不同類型和比例的磷脂材料/磷脂材料混合物、起泡劑和凍干支撐劑制備脂質微泡,并通過凍干粉形態(tài)及復溶性、脂質微泡濃度、脂質微泡形態(tài)、脂質微泡粒徑及粒徑分布等作為指標,對脂質微泡的質量進行評價。
　　 2、測定不同處方組成的脂質微泡凍干前預混物的共晶點、共熔點,并通過不同的凍干程序對脂質微泡預混物進行凍干,以凍干粉形態(tài)及復溶性、脂質微泡濃度、脂質微泡形態(tài)、脂質微泡粒徑及粒徑分布等作為指標,對脂質微泡的

3、質量進行評價。
　　 3、設計高溫、低溫、光照試驗對脂質微泡凍干粉的穩(wěn)定性影響因素進行考察,分別在5天和10天取樣,以凍干粉形態(tài)及復溶性、脂質微泡濃度、脂質微泡形態(tài)、脂質微泡粒徑及粒徑分布等作為指標,對不同條件下的脂質微泡進行評價。
　　 4、家兔為實驗動物,應用不同的脂質微泡對其肝部進行超聲造影,以造影開始時間、持續(xù)時間及造影效果等為指標,對造影效果進行評估。
　　 5、應用mPEG-DSPE和肝素修飾化泊洛沙

4、姆兩種材料,對脂質微泡進行表面修飾,并對修飾化的脂質微泡的微泡質量、穩(wěn)定性影響因素和造影效果進行考察。
　　 6、制備鹽酸表柔比星脂質微泡,體內試驗選用HL-60腫瘤細胞對鹽酸表柔比星脂質微泡的腫瘤抑制作用進行考察,體內選用HL-60、colo-205、HCT-116對鹽酸表柔比星脂質微泡的腫瘤抑制作用進行考察,并比較不同的給藥方式對腫瘤抑制作用的影響。
　　 結果:
　　 1、篩選實驗結果顯示:氫化蛋黃磷脂、D

5、SPC+DPPG(9:1)、DMPC+DPPG(9:1)三種磷脂/磷脂混合物作為脂質微泡成膜材料、吐溫-80為起泡劑、Poloxamer188為凍干支撐劑,磷脂材料、起泡劑、凍干支撐劑比例為2:5:50時,脂質微泡的質量較好。制備的脂質微泡具有良好的外觀及復溶性,脂質微泡濃度可達6.5×108個/ml,85％以上粒徑在2～8μm,微泡穩(wěn)定性良好。
　　 2、凍干工藝為:
　　 -22℃以下4h
　　 10℃900

6、min
　　 30℃600min
　　 3、實驗結果顯示:0℃時,5天微泡復溶性有所下降,數量明顯低于對照(P<0.05),粒徑增大(P<0.05),10天時,復溶性降低,復溶后出現碎屑,數量明顯低于對照(P<0.05),粒徑增大(P<0.05)；25℃時,脂質微泡各方面性能與對照組沒有差別；40℃時,脂質微泡的復溶性略有下降,其余方面與對照相當；強光照射時,脂質微泡各方面性能與對照組沒有差別。
　　 4、造影實

7、驗結果顯示:氫化蛋黃磷脂、DSPC+DPPG(9:1)、DMPC+DPPG(9:1)三種磷脂/磷脂混合物作為成膜材料的三種脂質微泡的造影開始時間沒有顯著性差異,均在6s左右,氫化蛋黃磷脂、DSPC+DPPG(9:1)作為成膜材料的兩種種脂質微泡的造影持續(xù)時間明顯高于DMPC+DPPG(9:1)為成膜材料的脂質微泡的造影時間(P<0.05),DSPC+DPPG(9:1)組造影時間略高于氫化蛋黃磷脂組(P<0.05),但兩者差距不大,兩者均

8、具有良好的超聲造影效果。
　　 5、復溶性方面,兩種修飾化脂質微泡的復溶性明顯好于空白脂質微泡。兩種脂質微泡之間沒有顯著性差異(p>0.05)。
　　 微泡質量方面:肝素修飾化脂質微泡在形態(tài)上與其余兩種微泡存在較大差異,肝素修飾化脂質微泡有異形和聚集現象存在；數量也明顯低于空白微泡(p<0.01)和PEG修飾化脂質微泡(p<0.01),空白微泡與PEG修飾化微泡在數量上沒有顯著性差異(p>0.05)；肝素修飾化脂質微泡的

9、粒徑小于PEG修飾化脂質微泡(p<0.05),兩種修飾化脂質微泡與空白脂質微泡之間沒有顯著性差異(p>0.05)。
　　 穩(wěn)定性影響因素實驗方面:低溫(0℃)對脂質微泡的質量影響較大,三種微泡在5天時,微泡濃度已經明顯低于0天樣品(p<0.05),10天時降低更加明顯(PEG組p<0.05,空白組與肝素組p<0.01),且復溶后存在磷脂碎屑；常溫條件(25℃)下,三組微泡均具有良好的穩(wěn)定性,復溶性良好。相對高溫條件(40℃)下,

10、空白組與PEG組微泡濃度保持穩(wěn)定,與0天時相比沒有顯著性差異(p>0.05),肝素組微泡濃度在10天時與0天相比,微泡濃度明顯下降(p<0.05)。
　　 光照影響因素試驗中,三組微泡在5天和10天時在復溶性、微泡濃度兩個方面,與0天相比沒有顯著性差異(p>0.05),復溶后均不存在磷脂碎屑。
　　 造影實驗方面:PEG修飾化脂質微泡造影效果良好,肝素修飾化脂質微泡幾乎沒有造影效果。
　　 6、鹽酸表柔比星脂質微

11、泡在體外和體內均具有良好的腫瘤抑制作用,明顯高于單純用藥組。不同給藥方式之間,差異不大。
　　 結論:
　　 1、得到三種穩(wěn)定性良好的脂質微泡的制備方法；
　　 2、得到了脂質微泡的凍干工藝；
　　 3、低溫影響脂質微泡的穩(wěn)定性,脂質微泡的最佳儲存條件為:常溫保存,無需避光。
　　 4、以HEPC和DSPC+DPPG(9:1)為膜材料的兩種脂質微泡具有良好的造影效果。
　　 5、得到PEG