氧濃度梯度下多形核白細胞的趨化特性與機制.pdf

1、缺氧是多種炎癥性疾病的共同病理生理過程，亦是細胞損傷最常見的原因。發(fā)生炎癥的組織常處于代謝旺盛的狀態(tài)，需消耗大量的氧，因此炎癥微環(huán)境常處于缺氧狀態(tài)。另一方面，炎癥細胞在遷移運動、處理異物（例如通過呼吸爆發(fā)產(chǎn)生氧自由基）等活動中需要大量ATP，需要大量的氧氣。因此，炎癥細胞從相對富氧的血液循環(huán)向相對缺氧的炎癥微環(huán)境浸潤（逆氧而行）的過程中，這一氧供需矛盾更加突出。雖然炎癥細胞可以通過無氧酵解獲得能量，具備較強的耐缺氧能力，但是僅僅通過無氧

2、酵解獲得的能量有限，同時氧自由基的產(chǎn)生仍需要較多的氧供給。而且，炎癥細胞仍然存在較完整的低氧感知相關的信號傳遞系統(tǒng)。因此，氧濃度梯度對炎癥細胞的遷移行為可能具有十分重要的作用，弄清炎癥細胞在氧濃度梯度下的運動特點以及機制，對適時適度控制炎癥反應以及炎性疾病的防治具有十分重要的意義。
　　目的：以大鼠外周血多形核白細胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)為研究對象，研究PMN在氧濃度梯度下的趨化特性

3、與機制。
　　方法：用ibidi6通道細胞趨化板，觀察PMN在氧濃度梯度下的趨化方向。用AP48孔趨化板觀察趨化因子或缺氧預處理后，PMN在缺氧條件下趨化能力的變化。用趨化實驗觀察不同缺氧程度、不同缺氧時間后，PMN培養(yǎng)上清的趨化能力，結(jié)合甲酰肽受體拮抗劑，分析PMN缺氧上清中甲酰肽受體激動劑水平。并用免疫印跡檢測PMN不同缺氧時間（0、3、6、12、24h）不同缺氧濃度（1％、5%、10%、21%）或趨化因子作用后胞紅蛋白（cy

4、toglobin, CYGB）的表達。
　　結(jié)果：在氧濃度梯度下，PMN趨化呈現(xiàn)明顯的方向性，PMN向氧濃度梯度的低氧側(cè)遷移。預缺氧增強PMN在缺氧條件下的趨化活性。細胞缺氧培養(yǎng)上清誘導的趨化反應顯著高于常氧培養(yǎng)上清，用甲酰肽受體特異性拮抗劑可顯著削弱這一反應。隨著氧濃度的降低，缺氧培養(yǎng)PMN的上清誘導的趨化反應增高。用甲酰肽受體激動劑預處理或缺氧預處理，顯著增強PMN在缺氧條件下對血清的趨化反應，并劑量依賴性地上調(diào)白細胞CYGB