綠原酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分綠原酸減輕脂肪酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)沉積
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　既往研究表明，綠原酸可調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝，提高胰島素敏感性。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，綠原酸對(duì)其作用尚不明確。本研究旨在利用體外實(shí)驗(yàn)來(lái)初步探討綠原酸對(duì)NAFLD的作用及其分子機(jī)制。
　　材料和方法:
　　體外實(shí)驗(yàn)選取人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞，采用游離脂肪酸(FFA)刺激48h誘導(dǎo)NAFLD體外細(xì)胞模型，

2、采用不同濃度的綠原酸刺激HepG2細(xì)胞來(lái)觀察綠原酸體外刺激對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響。利用Western Blot及熒光定量PCR(qRT-PCR)等手段檢測(cè)相關(guān)通路蛋白表達(dá)及其mRNA水平。采用小干擾RNA（siRNA）技術(shù)或藥物抑制劑來(lái)對(duì)通路各靶點(diǎn)進(jìn)行基因敲減或藥物抑制。利用肝細(xì)胞甘油三酯含量測(cè)定和油紅O染色評(píng)價(jià)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的情況。
　　結(jié)果:
　　本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):給予50μM綠原酸刺激HepG2細(xì)胞24小時(shí)，可減

3、輕FFA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積。通過(guò)分別對(duì)SIRT1、AMPK和LKB1進(jìn)行藥物抑制或siRNA基因敲減預(yù)處理，可阻斷綠原酸對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的保護(hù)作用。綠原酸減輕脂質(zhì)沉積的作用首先是通過(guò)上調(diào)SIRT1蛋白表達(dá)，增加其去乙?；钚?再通過(guò)磷酸化激活LKB1，由其介導(dǎo)并向下磷酸化激活A(yù)MPK;繼而上調(diào)脂質(zhì)氧化蛋白MLYCD和CPT1α的表達(dá)促進(jìn)脂肪酸β氧化，同時(shí)降低脂質(zhì)合成蛋白SREBP1c和FAS的表達(dá)抑制脂質(zhì)合成。
　　結(jié)論:

4、>　　本實(shí)驗(yàn)證實(shí)綠原酸可能通過(guò)SIRT1-LKB1-AMPK通路減輕FFA誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞脂質(zhì)沉積。
　　第二部分綠原酸減輕高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)沉積
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　結(jié)合第一部分體外實(shí)驗(yàn)中初步確立的綠原酸保護(hù)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積作用及其機(jī)制，我們利用小鼠在體試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證綠原酸的作用及分子通路。
　　材料和方法:
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取5-6周齡的C57BL/6小鼠，分別采用正常飲食、正常飲食添加綠原酸、高脂

5、飲食、高脂飲食添加綠原酸喂養(yǎng)8周觀察綠原酸對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂質(zhì)沉積的影響。利用肝臟組織甘油三酯含量測(cè)定、H&E或油紅O染色來(lái)評(píng)價(jià)肝臟脂質(zhì)沉積的情況。利用Western Blot及qRT-PCR等手段檢測(cè)相關(guān)通路蛋白表達(dá)及其mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　在高脂飲食的同時(shí)，飲水中添加綠原酸喂養(yǎng)8周可減輕由高脂飲食造成的肝臟脂質(zhì)沉積。結(jié)合第一部分結(jié)果，對(duì)SIRT1-LKB1-AMPK信號(hào)通路進(jìn)行驗(yàn)證:綠原酸可增加SIRT