Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機制中的作用.pdf

1、核因子相關因子-2(Nrf2)與機體的防御系統(tǒng)密切相關,是細胞防御氧化應激的重要調(diào)節(jié)因子,通過介導一系列抗氧化酶和2相解毒酶的表達,可以保護多種組織免受有害物質(zhì)的攻擊。研究表明Nrf2在肝臟的功能穩(wěn)定中起著重要的作用,可以降低藥物介導的肝臟毒性、減輕肝臟炎癥和肝纖維化、抑制化學致癌作用、并與肝細胞凋亡有關。深入研究可為治療疾病帶來新的途徑,故在本實驗中,觀察Nrf2在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)形成不同階段表達的變化情況,為NAFL

2、D的預防和治療提供新的思路。
　　 目的：本實驗通過喂養(yǎng)昆明小鼠高脂高膽固醇的方法建立NAFLD小鼠模型,研究在脂肪肝和脂肪性肝炎兩個階段,Nrf2的表達及血漿8-異前列腺素F2a的變化情況,探討Nrf2在氧化應激所致炎癥損傷中的作用,為進一步闡明NAFLD的發(fā)病機制及治療提供新的線索。
　　 方法：健康成年昆明雌性小鼠26只,正常飼養(yǎng)適應環(huán)境1周后,隨機分成2組:正常飲食組(對照組)10只,普通飼料喂養(yǎng)；高脂飲食組(實

3、驗組)16只,高脂飼料喂養(yǎng)。兩組均自由飲水和進食分籠喂養(yǎng)于20-25℃明暗各12小時的動物實驗室內(nèi),分別于8周末,12周末隨機抓取5只對照組小鼠和8只實驗組小鼠,處死前隔夜禁食,次日稱重后以10％的水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉,心臟穿刺取血,迅速摘取肝臟稱肝濕重,后用10％的甲醛固定,制作石蠟切片,常規(guī)HE染色,觀察肝臟組織的病理學變化,心臟血離心后取血清,應用7170-AHITAC全自動生化儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總膽

4、紅素、血糖、甘油三酯、膽固醇；運用免疫酶聯(lián)法檢測血漿中8-異前列腺素F2a的含量,用免疫組化法檢測Nrf2的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.對照組小鼠肝組織結(jié)構完整、清晰,肝小葉結(jié)構正常,中央靜脈大而壁薄,肝細胞排列成肝索,在中央靜脈周圍呈放射狀分布,細胞呈多邊形。8周模型組小鼠肝細胞中度細胞水腫,多數(shù)肝細胞內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡(脂肪變性),以小葉中央?yún)^(qū)受累明顯,伴有肝細胞水樣變性。12周模型組小鼠出現(xiàn)彌漫

5、性脂肪變性,呈現(xiàn)中至重度脂肪變性,小葉內(nèi)炎癥細胞浸潤,浸潤細胞以單核細胞、淋巴細胞為主,并有一些中性粒細胞浸潤以及散在的點狀壞死,匯管區(qū)炎癥相對較輕但未見明顯的纖維化改變。
　　 2.與對照組比較,8周模型組和12周模型組肝濕重量、肝指數(shù)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血糖、膽固醇均有顯著升高(p<0.01),總膽紅素、甘油三酯水平差異不顯著。
　　 3.對照組小鼠正常肝細胞中,Nrf2在極少數(shù)肝細胞胞漿中表達,8周實驗組小鼠肝細胞

6、中,Nrf2在受損肝細胞胞漿中較強表達,12周實驗組小鼠肝細胞中,Nrf2在受損肝細胞胞漿中強表達,實驗組小鼠8,12周末肝細胞胞漿Nrf2表達明顯強于同期對照組小鼠(p<0.05),且12周末明顯強于8周末(p<0.05).4.與對照組比較,8周模型組和12周模型組血漿8-異前列腺素F2a明顯升高,具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用高脂飼料喂養(yǎng)可以成功復制小鼠NAFLD模型,造模方法簡便易行