klotho基因在糖尿病腎病患者體內(nèi)表達(dá)狀況的研究.pdf

1、目的：對(duì)糖尿病腎病患者血液中klotho蛋白及胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)信號(hào)通路相關(guān)因子水平進(jìn)行分析研究，探討其在糖尿病腎病發(fā)生機(jī)制中的作用及相關(guān)的影響因素。
　　 方法：
　　 1.研究對(duì)象及分組：選取山東濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2010年9月至2011年6月門診及入院的2型糖尿病患者及于本院體檢中心進(jìn)行體檢的正常健康人群共149例作為研究對(duì)象，按照相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)將其分為三組，其中正常對(duì)照組(NC組)42例、糖尿病無(wú)腎病組

2、(DM組)61例、糖尿病腎病組(DN組)46例。
　　 2.空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測(cè)：清晨空腹抽取外周靜脈血，檢測(cè)FPG、FINS，根據(jù)公式(FPG*FINS)/22.5計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(IRI)，采用高壓液相色譜分析法檢測(cè)HbA1c含量。
　　 3.生化指標(biāo)檢測(cè)：清晨空腹抽取外周靜脈血，檢測(cè)血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)；采血

3、前一天開始留取24小時(shí)尿，測(cè)定尿微量白蛋白排泄率(UAER)。
　　 4.外周血白細(xì)胞原位雜交：取肝素抗凝血約1mL，檢測(cè)外周血白細(xì)胞iNOSmRNA和eNOSmRNA表達(dá)，比較各組之間差異。
　　 5.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：清晨空腹抽取外周靜脈血，離心取血清，檢測(cè)各組血清中klotho蛋白、IGF-1含量。
　　 6.反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)：取肝素抗凝血1mL，檢測(cè)各組外周血全血中klot

4、homRNA、IGF-1RmRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.一般狀況：各組年齡之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DN組病程明顯高于DM組病人(P<0.05)。收縮壓DN組明顯高于NC組(P<0.01)；舒張壓DN組與DM組均明顯高于NC組(P<0.05)。
　　 2.FPG、FINS、HbA1c和UAER檢測(cè)結(jié)果：DM組和DN組FPG、FINS、IRI和HbA1c含量與NC組相比均明顯升高(P<0.

5、01)，DM組和DN組兩組之間FPG、FINS、IRI含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但HbA1c含量DN組與DM組相比顯著升高(P<0.01)。
　　 3.生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果：各組血清中TC比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DM組和DN組血清中TG水平與NC組相比均明顯增高(P<0.01)。血清中BUN、Cr水平DN組與NC組、DM組相比均明顯升高(P<0.01)。UARE水平DM組和DN組均明顯高于NC組(P<0

6、.01)，DM組和DN組兩組間比較DN組增高更明顯(P<0.01)。
　　 4.外周血白細(xì)胞原位雜交iNOSmRNA、eNOSmRNA表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果：iNOSmRNA、eNOSmRNA表達(dá)水平DM和DN兩組與NC組比較均明顯增高(P<0.01)，但DN組與DM組比較iNOSmRNA、eNOSmRNA表達(dá)水平均有顯著降低(P<0.01)。
　　 5.血清中klotho蛋白、IGF-1含量檢測(cè)結(jié)果：DM組和DN組血清中kl

7、otho蛋白含量均明顯低于NC組(P<0.01)，DN組klotho蛋白含量與DM組相比明顯降低(P<0.05)。DM組血清中IGF-1含量明顯高于NC組(P<0.05)，DN組與NC組相比顯著升高(P<0.01)，DM組和DN組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.外周血klothomRNA、IGF-1RmRNA表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果：DM組和DN組klothomRNA和IGF-1RmRNA表達(dá)水平與NC組相比均顯著降

8、低(P<0.01)，DN組與DM組比較降低更明顯(P<0.05)。
　　 7.各指標(biāo)間相關(guān)性分析結(jié)果：DN組患者UAER與年齡、病程、FPG、IRI、TG、IGF-1成正相關(guān)(P<0.05)，與iNOSmRNA、eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成負(fù)相關(guān)(P<0.05)；外周血白細(xì)胞iNOSmRNA表達(dá)與eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明顯正相關(guān)(P<0.01)，與年齡、病程、收縮壓、UAER、IGF-1

9、成負(fù)相關(guān)(P<0.05)；外周血白細(xì)胞eNOSmRNA表達(dá)與iNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明顯正相關(guān)(P<0.01)，與年齡、病程、收縮壓、舒張壓、HbA1c、Cr、UAER、IGF-1成負(fù)相關(guān)(P<0.05)；血清中klotho蛋白含量與iNOSmRNA、eNOSmRNA成明顯正相關(guān)(P<0.01)，與年齡、病程、收縮壓、HbA1c、TG、Cr、UAER、IGF-1均成負(fù)相關(guān)(P<0.05)；血清中IGF-1含量與年齡

10、、病程、收縮壓、FPG、IRI、HbA1c、TC、TG、Cr、UAER成正相關(guān)(P<0.05)，與iNOSmRNA、eNOSmRNA、血清中klotho蛋白含量成明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.DM、DN組外周血白細(xì)胞klothomRNA表達(dá)及血清klotho蛋白含量均明顯降低，并以DN組降低更著。提示糖尿病的發(fā)病與klotho信號(hào)的作用減弱明顯相關(guān)，且病情愈重klotho信號(hào)減弱程度愈明顯。

11、>　　 2.DM、DN組血清IGF-1含量明顯升高：IGF-1RmRNA表達(dá)水平降低，且以DN組降低更顯著。提示IGF-1配體信號(hào)增強(qiáng)參與了DM及DN的發(fā)?。煌瑫r(shí)在DM及DN發(fā)病過(guò)程中，IGF-1配體信號(hào)增強(qiáng)引起了IGF-1受體信號(hào)(IGF-1RmRNA)的下調(diào)，且下調(diào)程度與病情加重程度明顯相關(guān)。IGF-1信號(hào)系統(tǒng)在DM及DN發(fā)病中的確切作用機(jī)制尚待探討。
　　 3.NC組外周血白細(xì)胞中無(wú)iNOSmRNA表達(dá)，DM組和DN組i