柑橘砧穗間可移動mRNA分析及幾個FT改造載體功能分析.pdf

1、本論文為了探索韌皮部mRNA遠距離傳遞機制，和FT mRNA移動的可能性，構(gòu)建了35S.PtFT∶GFP，35S∶PtFT GFP tRNA22和35S∷PtFT∶tRNA22超表達載體，以野生型番茄分別與超表達PtFT GFP，PtFT GFP tRNA22和PtFT tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄進行嫁接，以GFP熒光示蹤研究FT的傳導(dǎo)能力、方向、途徑和分配規(guī)律;通過在PtFT和PtFT GFP基因序列后面加tRNA22，來研究改造的FT

2、mRNA在促進轉(zhuǎn)基因植株成花能力上有增強。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)對實驗室前期克里曼丁/早實枳種間嫁接組合轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析，篩查到1073個可移動的mRNA，從中挑取了61個基因進一步驗證。根據(jù)候選基因目標(biāo)SNP附近PCR擴增產(chǎn)物測序分析，有15個mRNA分子移動獲得證實，其中8個mRNA由接穗向砧木移動，有5個mRNA由砧木向接穗移動，有2個mRNA發(fā)生雙向移動。
　　(2)通過利用PlaMoM(Plant Mob

3、ile Macromolecules)TLS finder在線分析工具(http://www.systembioinfo.org/plamom/)，對檢測發(fā)現(xiàn)的mRNA的TLS類似結(jié)構(gòu)進行了掃描，發(fā)現(xiàn)向上移動和向下移動的mRNA中分別有8.6％和14.9％具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)，說明含有TLS類似結(jié)構(gòu)的基因可能有利于mRNA移動或移動過程的穩(wěn)定性。
　　(3)構(gòu)建了3SS.∶PtFTGFP、35S∷PtFT.GFP∶tRNA22和35S∷P

4、tFT tRNA22超表達載體，分別轉(zhuǎn)化番茄，獲得了超表達陽性株系，從DNA水平和RNA水平進行陽性檢測，結(jié)果表明外源基因已經(jīng)成功整合到番茄的基因組中。
　　(4)對轉(zhuǎn)基因株系進行表型觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型番茄相比，PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22超表達番茄都表現(xiàn)出早花現(xiàn)象，而PtFT∶GFP∶tRNA22超表達番茄沒有表現(xiàn)出明顯的早花現(xiàn)象。這表明PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22基因的超表達均可以促進番茄的早花。<

5、br>　　(5)將野生型番茄分別嫁接到超表達PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄上，利用熒光顯微鏡研究PtFT∶GFP∶tRNA22在蛋白質(zhì)水平的移動，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在野生型接穗中嫁接口上1cm處檢測到熒光信號，在嫁接口上4cm處熒光信號消失，說明PtFT∶GFP∶tRNA22基因可以在蛋白質(zhì)水平發(fā)生移動。但在接穗部位未檢測到外源PtFT mRNA，表明外源PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA2的mR