水稻兩個(gè)miRNA靶基因功能分析載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、稻瘟病作為水稻三大病害之一，是嚴(yán)重影響水稻生產(chǎn)的重要病害。目前研究表明，植物中的miRNA可以調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，生物和非生物脅迫，以及抗性反應(yīng)。但是其中針對(duì)miRNA調(diào)節(jié)水稻和稻瘟病菌互作的研究報(bào)道很少，本實(shí)驗(yàn)室鑒定出了兩個(gè)正調(diào)稻瘟病抗性的miRNA: miRNA398和miRNA160，并且他們可能是通過(guò)抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄來(lái)調(diào)控稻瘟病抗性。為了研究miRNA160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os0

2、4g48410的生物學(xué)功能，驗(yàn)證靶基因LOC_Os06g47150與miRNA160的關(guān)系、靶基因LOC_Os04g48410與miRNA398的關(guān)系，并進(jìn)一步闡釋miRNA398和miRNA160的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究做準(zhǔn)備。本課題通過(guò)構(gòu)建miRNA160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410過(guò)表達(dá)載體，過(guò)表達(dá)突變載體，以及RNAi載體，并遺傳轉(zhuǎn)化水稻獲得了相應(yīng)材料。
　　本研究中，首先

3、是構(gòu)建miRNA160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410過(guò)表達(dá)載體，通過(guò)注射本生煙觀(guān)察這兩個(gè)基因的亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)靶基因LOC_Os04g48410主要在細(xì)胞膜上表達(dá)，而靶基因LOC_Os06g47150主要在細(xì)胞核中表達(dá)。其次是構(gòu)建miRNA160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410過(guò)表達(dá)突變載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法轉(zhuǎn)化水稻，經(jīng)潮霉