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文檔簡介
1、蛋白質(zhì)的賴氨酸乙?;菑募?xì)菌到真核生物都普遍存在的一種翻譯后修飾。幾十年來,研究者們發(fā)現(xiàn)賴氨酸乙?;谡婧松锛?xì)胞中發(fā)揮著許許多多的生物學(xué)功能。近幾年,在細(xì)菌和古生菌中,也發(fā)現(xiàn)了這種翻譯后修飾的廣泛存在。盡管如此,其在原核細(xì)胞中的分布范圍仍然不太清楚,這點(diǎn)也成為了開展原核系統(tǒng)中賴氨酸乙酰化修飾功能研究的障礙。
蛋白質(zhì)的賴氨酸乙?;且环N可逆的修飾,主要由蛋白質(zhì)乙酰轉(zhuǎn)移酶和去乙?;缚刂?。在細(xì)菌中,研究最多的去乙?;甘桥c酵
2、母中沉默信息調(diào)節(jié)蛋白Sir2同源的CobB蛋白。雖然近幾年來有關(guān)CobB蛋白的功能研究取得了一些進(jìn)展,但其底物和在細(xì)菌中的功能仍然不清楚。
首先,我們使用蛋白質(zhì)組芯片技術(shù)篩選到了十五種具有賴氨酸乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì),其中的九種可以被大腸桿菌CobB催化去乙?;∟-羥基芳香胺O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NhoA)。我們使用Western blot驗(yàn)證了NhoA的確可以被CobB去乙?;⒔Y(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定出NhoA中三個(gè)具有可逆
3、的乙?;揎椀馁嚢彼釟埢6c(diǎn)突變?cè)囼?yàn)顯示了其中兩個(gè)乙?;嚢彼岬耐蛔儠?huì)導(dǎo)致NhoA乙?;降慕档汀_M(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),NhoA的N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NAT)活性和O-乙酰轉(zhuǎn)移酶(OAT)活性都會(huì)受到這兩個(gè)乙?;嚢彼釟埢蛔兊挠绊?。并且,得到了直接的數(shù)據(jù),證實(shí)CobB對(duì)NhoA的去乙酰化作用提高了NhoA在體外的NAT活性。為了進(jìn)一步闡明體內(nèi)的賴氨酸乙?;揎棇?duì)NhoA活性的影響,我們對(duì)比了cobB基因敲除菌株與野生型菌株NhoA蛋白的乙
4、?;剑约皩?duì)硝基芳香族化合物的誘變敏感性。結(jié)果顯示,cobB基因的敲除會(huì)導(dǎo)致NhoA乙?;降奶岣吆蚈AT活性的降低。這些結(jié)果說明,可逆的賴氨酸乙?;揎椩隗w外和體內(nèi)條件下都能夠調(diào)節(jié)NhoA的活性。并且,CobB在體外可以通過催化NhoA的去乙?;岣咂銷AT活性,在體內(nèi),也很可能是通過相同的方式調(diào)節(jié)NhoA的OAT活性。
綜上所述,本研究中我們鑒定到了新的賴氨酸乙?;揎椀牡鞍踪|(zhì)和去乙?;窩obB的底物,發(fā)現(xiàn)了賴
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