利用RAPD技術(shù)和ITS-2序列研究11種天牛的親緣關(guān)系.pdf

1、本文探索了幾種可以快速、簡便地從天牛干標(biāo)本、液浸標(biāo)本和新鮮標(biāo)本中提取DNA模板的方法，得到了3種針對不同類型標(biāo)本的具體提取方法，對所獲得的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增分析表明，這些提取方法切實可行。利用RAPD和ITS-2分子標(biāo)記技術(shù)，對11種天牛進(jìn)行研究，研究結(jié)果表明： 1.一般來說，鞘翅目昆蟲與其它昆蟲的不同之處就是體壁非常堅硬，透氣透水性差，在同等條件下，較其他昆蟲陰干的時間要長，陰干時間越長對DNA的質(zhì)量越不利。為保證D

2、NA質(zhì)量最好烘干或者冰凍。長時間保存的干標(biāo)本，基因組DNA降解嚴(yán)重并且存在影響PCR擴(kuò)增的因素，從干標(biāo)本中提取基因組DNA的非常關(guān)鍵的處理措施，是在STE緩沖液中浸漬干標(biāo)本24小時，然后用去離子水沖洗3次，此方法大大減少了基因組DNA的機(jī)械斷裂，有利于保護(hù)干標(biāo)本基因組DNA，減輕或排除對PCR擴(kuò)增反應(yīng)的影響。 2.從本次實驗的RAPD-PCR擴(kuò)增圖譜中可看出，經(jīng)過PCR之后的DNA能呈現(xiàn)明顯的多態(tài)性。實驗結(jié)果證明，同種天牛用同

3、一引物擴(kuò)增幼蟲和成蟲所獲得的結(jié)果相同，這為更多近緣種的DNA多態(tài)性研究及重要種的鑒定提供了可能。 3.利用16個隨機(jī)引物對11種天牛的親緣關(guān)系進(jìn)行了RAPD分析，共檢測到157個位點，多態(tài)位點百分率在5.10％～12.10％之間，多態(tài)位點百分率最高的是青楊脊虎天牛(X.rusticus)，最低的是雙條杉天牛(S.bifasciatus)，利用RAPD分子標(biāo)記構(gòu)建了11種天牛的遺傳關(guān)系聚類圖。 4.經(jīng)測序得到的9種天牛