黃芩苷和黃芩素提取分離工藝研究及抗氧化活性評價(jià).pdf

1、黃芩苷和黃芩素是唇形科植物黃芩的主要化學(xué)成分，黃芩有清熱燥濕、瀉火解毒、安胎止血等功效，主要成分有黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等。
　　目的：本論文主要為了研究利用基于組織破碎法的閃式提取器提取黃芩中黃芩苷和黃芩素的最佳工藝，并對分離純化得到的黃芩苷和黃芩素進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，且評價(jià)黃芩苷和黃芩素對乳鼠心肌細(xì)胞抗氧化能力。
　　方法：主要以提取出的黃芩苷和黃芩素的含量、得膏率為指標(biāo)，按照二因素四水平表進(jìn)行正交試驗(yàn)，考察溶劑和

2、溶劑用量兩個(gè)因素，得到最佳提取工藝。利用醇提酸沉法分離純化黃芩苷，溶劑分離法分離純化黃芩素。參考國內(nèi)外文獻(xiàn)、《中國藥典》以及植物提取物國際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)，利用熔點(diǎn)對比法、薄層色譜法、紫外-可見分光光度法、核磁共振法、高效液相色譜法、氣相色譜法等對提取出的黃芩苷和黃芩素進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。通過H2O2損傷乳鼠心肌細(xì)胞建立氧化應(yīng)激模型，western blot法檢測硫氧還蛋白-過氧化物酶Ⅱ（PRXⅡ)蛋白，評價(jià)黃芩苷和黃芩素對乳鼠心肌細(xì)胞的抗氧化能力。

3、
　　結(jié)果：1.利用閃式提取器提取黃芩苷的最佳工藝是藥材飲片質(zhì)量與乙醇體積比為1:12的60％乙醇提取3次，提取黃芩素的最佳工藝是用12倍量的55%乙醇提取3次。黃芩苷的提取純化收率為7.8%，黃芩素的提取純化收率為5.8%。
　　2.熔點(diǎn)檢測法檢測得出黃芩苷和黃芩素的熔點(diǎn)與參考值相同，薄層色譜法檢示得出與標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值相同，1H-NMR、13C-NMR譜圖結(jié)果與參考值相同。用高效液相檢測黃芩苷的純度約95%，黃芩素純度為9

4、7%。對黃芩苷干燥失重檢查結(jié)果為4.52%，黃芩素干燥失重檢測結(jié)果為3.12%；灰度檢查結(jié)果得出黃芩苷為0.09%，黃芩素為0.04%；黃芩苷和黃芩素重金屬檢查均不比標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色深；黃芩苷乙醇溶劑殘留量檢查結(jié)果為0.02%，黃芩素未檢測到乙醇溶劑殘留量，黃芩素中丙酮?dú)埩袅繖z查結(jié)果為0.25%，乙酸乙酯殘留量檢測為0.01%；黃芩苷中未檢測到農(nóng)藥殘留量，黃芩素未檢測到p,pˊ-DDT、o,pˊ-DDT，六六六(α-BHC、β-BHC、γ-

5、BHC、δ-BHC)總殘留量為0.082 mg/kg，滴滴涕(p,pˊ-DDE、p,pˊ-DDD、p,pˊ-DDT、o,pˊ-DDT)殘留量為0.006 mg/kg，檢測結(jié)果小于藥典限度0.2 mg/kg。
　　3.用200μmol/L H2O2濃度損傷心肌細(xì)胞2 h，成功建立氧化應(yīng)激模型。western blot檢測PRXⅡ蛋白顯示，氧化應(yīng)激模型組PRXⅡ蛋白表達(dá)量大于正常組蛋白表達(dá)量。損傷后的心肌細(xì)胞加入黃芩苷和黃芩素，PRX