ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域VNTR-ZNF和-14bp位點(diǎn)基因變異對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響.pdf

1、目的：探討腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)基因啟動(dòng)子區(qū)域VNTR-ZNF位點(diǎn)和-14bp位點(diǎn)多態(tài)性在天津地區(qū)人群中的分布頻率及其與冠心病(CHD)和血漿高密度脂蛋白(HDL)水平的關(guān)系，并通過(guò)體外報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)觀察2位點(diǎn)變異對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　 方法：⑴隨機(jī)抽取天津市胸科醫(yī)院2007年9月-2009年4月住院的心肌梗死患者166例(CHD組)和同期本單位健康體檢者99例(對(duì)照組)，提取染色體DNA，測(cè)定ABCA1基因啟

2、動(dòng)子區(qū)域的基因多態(tài)性。采用PCR方法擴(kuò)增含ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域VNTR-ZNF位點(diǎn)ACCCC插入/缺失多態(tài)性基因片段，經(jīng)8％聚丙烯酰胺凝膠電泳分離并確定其基因型；PCR方法擴(kuò)增含-14bp位點(diǎn)C/T單核苷酸變異多態(tài)性基因片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切及瓊脂糖凝膠電泳分離基因多態(tài)性片段，以觀察2個(gè)多態(tài)位點(diǎn)變異與CHD和HDL的相關(guān)性。⑵采用基因重組技術(shù)將含VNTR-ZNF位點(diǎn)ACCCC插入型和缺失型DNA片段及同時(shí)含VNTR-ZNF位點(diǎn)不同

3、變異與-14bpC或T組合的DNA片段插入攜帶熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)載體PGL2，構(gòu)建重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，測(cè)定攜帶不同基因變異DNA片段的質(zhì)粒熒光素酶活性，觀察和分析啟動(dòng)子部位VNTR-ZNF和-14bp位點(diǎn)不同等位基因?qū)D(zhuǎn)錄活性的影響。
　　 結(jié)果：①被檢總?cè)巳篈BCA1基因VNTR-ZNF位點(diǎn)等位基因頻率分別為ACCCC插入型為0.313，缺失型為0.687；基因型頻率分別為ACCCC插入型純合子

4、6.4％，缺失型純合子43.8％，插入/缺失型雜合子49.8％。三種基因型頻率和等位基因頻率在冠心病組和對(duì)照組間分布差異無(wú)顯著性，血漿HDL含量在三種基因型中差異亦無(wú)顯著性(P>0.05)。②被檢總?cè)巳篈BCA1基因-14bp位點(diǎn)等位基因頻率分別為C等位基因?yàn)?.691，T等位基因?yàn)?.309；基因型頻率分別為CC型44.2％，TT型6.0％，CT型49.8％，三種基因型頻率和等位基因頻率在冠心病組和對(duì)照組間分布差異無(wú)顯著性，血漿HDL

5、含量在三種基因型中差異亦無(wú)顯著性(P>0.05)。③基因重組部分成功構(gòu)建了PGL2-ZNF-ACCCCDel、PGL2-ZNF-ACCCCIns單位點(diǎn)重組質(zhì)粒和PGL2-ZNFDel-14C、PGL2-ZNFDel-14T、PGL2-ZNFIns-14C、PGL2-ZNFIns-14T雙位點(diǎn)重組質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞培養(yǎng)48h，測(cè)定細(xì)胞裂解液中報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯示單位點(diǎn)的質(zhì)粒中PGL2-ZNF-ACCCCDel重組質(zhì)粒熒光

6、素酶活性明顯高于PGL2-ZNF-ACCCCIns重組質(zhì)粒，雙位點(diǎn)的質(zhì)粒中PGL2-ZNFDel-14C重組質(zhì)粒熒光素酶活性明顯高于PGL2-ZNFIns-14C重組質(zhì)粒，PGL2-ZNFDel-14T重組質(zhì)粒，PGL2-ZNFIns-14T重組質(zhì)粒。
　　 結(jié)論：⑴ABCA1基因啟動(dòng)子區(qū)域VNTR-ZNF位點(diǎn)ACCCC插入/缺失變異與血漿HDL水平和冠心病無(wú)關(guān)，-14bp位點(diǎn)C/T基因變異與血漿HDL水平和冠心病亦無(wú)關(guān)。天津地