人STK11基因核心啟動(dòng)子區(qū)域初步界定.pdf

1、PJ綜合征(Peutz-Jeghers syndrome)是一種常染色體顯性遺傳疾病。其疾病基因STK11(又稱為L(zhǎng)KBl)于1998年被克隆，定位于19p13.3，包括10個(gè)外顯子，其中的9個(gè)為編碼區(qū)，從端粒向著絲粒方向轉(zhuǎn)錄，基因所編碼的蛋白質(zhì)STKII是一種絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶。STKII參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞極性、能量代謝等多種生理病理過程。STKII的表達(dá)豐度在個(gè)體發(fā)育的不同階段存在組織與時(shí)相差異性，提

2、示STKII的表達(dá)受到復(fù)雜而精密的調(diào)控。在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)基因進(jìn)行調(diào)控在基因表達(dá)過程中有著重要的意義，但目前尚無(wú)有關(guān)其轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究的報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)通過多種生物信息學(xué)軟件，預(yù)測(cè)人STKII可能的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和重要的調(diào)控區(qū)域，結(jié)果提示：STKII基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)可能在-1194(以起始密碼子的第一個(gè)核苷酸為+1，下同)，-1109亦為可能的候選轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，-1403～-900可能包含重要的調(diào)控序列。以此為基礎(chǔ)，我們構(gòu)建了含人STK

3、II基因上游序列缺失片段的pGL3重組載體，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染L-02、HeLa兩種細(xì)胞系，通過檢測(cè)熒光素酶活性分析缺失片段的啟動(dòng)活性。結(jié)果顯示各缺失片段在兩株細(xì)胞均有啟動(dòng)活性；當(dāng)3’端固定在-918，5’端由-1943～-1425的移位對(duì)啟動(dòng)活性無(wú)明顯影響，提示-1943～-1425的區(qū)間內(nèi)不存在重要的順式作用元件；將5’端固定在-1943，隨著3’端向5’的縮短(-918→-1039→-1160)，啟動(dòng)活性明顯增強(qiáng)(活性pGL3-1943A>

4、pGL3-1943B>pGL3-1943C)，提示-1160～-1039和-1039～-918的區(qū)間分別存在負(fù)性順式作用元件，同時(shí)提示核心啟動(dòng)子的3’端位于-1160的5’末端，在pGL3-1322(-1322～-918)亦觀察到啟動(dòng)活性，提示核心啟動(dòng)子的5’端應(yīng)該位于-1322的3’末端，因此，人STK11的核心啟動(dòng)子位于-1322～-1160之間，-1160～-1039和-1039～-918的區(qū)間存在負(fù)性順式作用元件。人STK11核