過表達肌漿網(wǎng)鈣ATP酶治療慢性缺血性心力衰竭的實驗研究.pdf

1、第一章小型豬慢性缺血性心力衰竭模型的建立與評價在我國，慢性心肌缺血己成為心力衰竭最重要的病因。本研究的目的是建立慢性缺血性心力衰竭的大動物模型，為研究其病理生理機制和防治手段奠定基礎(chǔ)。采用開胸前降支起始段ameroid縮窄環(huán)植入法建立小型豬慢性缺血性心衰模型，術(shù)后第4周采用心肌核素灌注SPECT顯像確認局部心肌缺血，經(jīng)胸超聲心動圖檢查測定心臟功能，并應(yīng)用放射免疫法測定血清心衰相關(guān)炎性因子和神經(jīng)體液因子的變化。缺血組12只小型豬順利完成了

2、開胸ameroid縮窄環(huán)植入術(shù)，4只動物行假手術(shù)作為對照。術(shù)后第4周缺血組前降支供血區(qū)域存在不可逆灌注缺損，與對照組相比，心臟整體收縮、舒張功能，缺血心肌局部厚度及局部運動能力均顯著下降，伴隨血清心衰相關(guān)炎性因子TNF-α，神經(jīng)體液因子BNP、AngⅡ和ET-1水平的顯著增高，符合慢性缺血性心衰的病理生理改變。說明在豬的前降支防治amemid縮窄環(huán)是建立慢性缺血性心衰模型的可靠方法。
　　 第二章 SERCA2a過表達對慢性缺血

3、性心力衰竭小型豬心功能的改善作用
　　 轉(zhuǎn)基因過表達SERCA2a可改善多種原因所致心衰動物模型的心功能，然而，其對慢性缺血性心衰心功能的影響還不清楚。本研究旨在觀察重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的SERCA2a基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對慢性缺血性心衰小心豬的治療作用。將第一章建立的心衰動物模型，隨機分為EGFP轉(zhuǎn)導(dǎo)組和SERCA2a轉(zhuǎn)導(dǎo)組，開胸心肌內(nèi)直接注射進行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。8周后超聲心動圖、血流動力學檢測測定SERCA2a基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對心功能的影響，心肌核素灌

4、注顯像評價缺血區(qū)心肌灌注，放免法測定血清心衰相關(guān)炎性因子和神經(jīng)體液因子，并行Western Blot測定缺血心肌中SERCA2a蛋白的表達量和活性變化。結(jié)果表明重組腺相關(guān)病毒可有效介導(dǎo)SERCA2a在心肌組織中的表達，8周后，與EGFP組相比，SERCA2a組心臟整體收縮、舒張功能，局部缺血心肌運動能力和缺血區(qū)室壁厚度均顯著增加，伴隨血清心衰相關(guān)炎性因子和神經(jīng)體液因子水平的顯著下降。兩組缺血區(qū)心肌灌注情況無顯著差異。表明SERCA2a過

5、表達短期內(nèi)（基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后8周）對缺血心肌灌注無影響，但可顯著改善慢性缺血性心衰小型豬的心臟功能，可能成為慢性缺血性心衰治療的潛在手段。
　　 第三章SERCA2a過表達對慢性缺血心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡通路的影響
　　 心肌細胞凋亡是缺血性心衰發(fā)生的重要原因，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡通路是新近發(fā)現(xiàn)的心肌細胞凋亡機制。本研究的目的是觀察SERCA2a基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對缺血心肌細胞凋亡的影響及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡通路的關(guān)系。TUNEL法檢測第二章

6、各組動物缺血心肌細胞凋亡情況，行免疫組化和Western Blot測定UPR通路ATF6、IRE1和PERK的活化情況以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路CHOP、caspase-12和JNKs的活性。結(jié)果表明，缺血心肌組織中心肌細胞凋亡顯著增強，伴隨UPR信號通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路及其下游信號分子的激活。SERCA2a基因轉(zhuǎn)導(dǎo)可顯著減輕缺血心肌細胞的凋亡，并可逆轉(zhuǎn)上述UPR信號通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路及其下游信號分子的活化。說明減弱內(nèi)