LINC01225促進(jìn)原發(fā)性肝癌發(fā)生與發(fā)展的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　長鏈非編碼RNA是潛在的原發(fā)性肝癌的生物學(xué)標(biāo)志物。我們希望通過這篇研究鑒別出原發(fā)性肝癌相關(guān)的長鏈非編碼RNA，并進(jìn)一步闡述其在原發(fā)性肝癌發(fā)生與發(fā)展過程中的作用機(jī)制。
　　方法:
　　實時定量PCR檢測LINC01225在肝癌組織，肝癌細(xì)胞系，肝癌患者血清及正常人血清中的表達(dá)水平。利用慢病毒-短發(fā)卡RNA構(gòu)建LINC01225穩(wěn)定敲低細(xì)胞系。在LINC01225敲低細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染LINC01225過表達(dá)質(zhì)粒。體

2、外實驗:采用CCK8實驗、EdU法檢測細(xì)胞增殖能力，Transwell實驗檢測細(xì)胞侵襲能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞抗凋亡能力及周期的改變。體內(nèi)實驗:裸鼠皮下荷瘤觀察腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)增殖能力，構(gòu)建腹腔轉(zhuǎn)移模型觀察細(xì)胞侵襲能力，通過尾靜脈注射懸浮腫瘤細(xì)胞觀察肺部轉(zhuǎn)移灶來探究腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的改變。機(jī)制研究:實時定量PCR，western blot技術(shù)，基因芯片技術(shù)，質(zhì)譜分析，免疫共沉淀等技術(shù)分析LINC01225在肝癌中的作用機(jī)制。
　　結(jié)

3、果:
　　我們發(fā)現(xiàn)LINC01225在肝癌中呈高表達(dá)。敲低LINC01225后，肝癌細(xì)胞系MHCC97H，SMCC7721的增殖及侵襲能力受到明顯抑制，并呈現(xiàn)出細(xì)胞周期阻滯及抗凋亡能力的減弱。在LINC01225敲低細(xì)胞系中再表達(dá)LINC01225，細(xì)胞的增殖及侵襲能力得到恢復(fù)和增強(qiáng)。敲低LINC01225使腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移受到抑制。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，LINC01225能夠與內(nèi)皮生長因子受體結(jié)合，調(diào)節(jié)EGFR蛋白水平，繼而調(diào)控EGFR