肝硬化在原發(fā)性肝癌的發(fā)生過程中所起作用的分子機制研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文肝硬化在原發(fā)性肝癌的發(fā)生過程中所起作用的分子機制研究姓名：宋天強申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：郝希山2003.5.1天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文目前，國內(nèi)外關(guān)于肝硬化在肝癌的發(fā)生過程中所起作用的研究少有報道¨‘6 1 ，多是針對個別己知的癌基因或抑癌基因，進行大規(guī)模差異基因的篩選并構(gòu)建e D N A 文庫的未見有報道。本研究應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)( S S H ) ，對肝硬化組織與正常肝組織差異表達

2、基因進行篩選，構(gòu)建差異表達基因的削減e D N A 文庫，并對部分克隆( 7 0 個) 進行質(zhì)粒酶切和P C R 雙重鑒定，并對其中1 6 個陽性克隆進行基因序列分析、同源性檢索，為進一步研究肝硬化在肝癌發(fā)生發(fā)生過程中的作用奠定了分子水平的基礎(chǔ)。第一部分伴肝細胞癌的肝硬化組織與正常肝組織差異表達基因的篩選目的：篩選伴肝細胞癌的肝硬化組織與正常肝組織差異表達基因。方法：采用抑制削減雜交技術(shù)，以3 例正常肝組織及3 例有肝癌背景的肝硬化組織

3、作為對比材料分離出m R N A ，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄成雙鏈e D N A 后，分成驅(qū)動子與檢測子，將檢測子連接上特定的接頭，通過兩輪不平衡雜交、兩次P C R ，篩選并擴增出兩種組織間所有差異表達的基因。并進行了削減效率的驗證。結(jié)果：m R N A 提取檢測、e D N A 酶切消化檢測、接頭連接效率檢測、P C R 削減效率檢測均達到實驗設(shè)計要求。結(jié)論：采用抑制削減雜交技術(shù)首次成功地分離出全部伴肝細胞癌的肝硬化組織與正常肝組織所有差異表達的基