郝芍川芎有效部位對(duì)波動(dòng)性高血糖介導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷過程中血小板活化及PKCβ1表達(dá)的影響.pdf

1、2型糖尿病是冠心病的等危癥，血管并發(fā)癥的發(fā)生是糖尿病患者出現(xiàn)高致殘率、高致死率的主要原因。冠心病與血瘀證關(guān)系密切，糖尿病高血糖狀態(tài)下存在的高血粘度現(xiàn)象以及伴隨局部血栓形成的血管并發(fā)癥是中醫(yī)“血瘀”的具體體現(xiàn)。以陳可冀院士為首的課題組一直致力于血瘀證實(shí)質(zhì)的探索，前期通過納入冠心病血瘀證患者并應(yīng)用寡核苷酸基因芯片技術(shù)成功構(gòu)建了冠心病血瘀證白細(xì)胞差異基因表達(dá)譜，同時(shí)進(jìn)一步深入分析發(fā)現(xiàn)，其中的差異基因蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)位于冠心病血瘀證

2、疾病網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵調(diào)控環(huán)節(jié)。機(jī)體血糖水平過高是導(dǎo)致糖尿病血管病變發(fā)生的主要病理因素。高血糖狀態(tài)下，血糖的急劇波動(dòng)更容易誘發(fā)血管內(nèi)皮損傷和血管并發(fā)癥的發(fā)生。這已成為現(xiàn)階段糖尿病預(yù)防和治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。蛋白激酶C(PKC)途徑被認(rèn)為是糖尿病血管病變的關(guān)鍵機(jī)制。那么，作為冠心病血瘀證關(guān)鍵調(diào)控基因的PKCβ1是否也在具有明顯血瘀證證候特點(diǎn)的糖尿病血管并發(fā)癥，特別是波動(dòng)性高血糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷中發(fā)揮重要作用呢？機(jī)體“血瘀證”狀態(tài)往往伴隨著體內(nèi)

3、血小板的高聚集活化，那么，在具有明顯血瘀征象的糖尿病患者體內(nèi)，血糖波動(dòng)性的增加是否會(huì)對(duì)其機(jī)體的血小板聚集活化產(chǎn)生影響？作為冠心病血瘀證關(guān)鍵調(diào)控分子的PKCβ1又與其具有怎樣的關(guān)系呢？赤芍、川芎作為具有代表性的活血化瘀中藥，廣泛用于血瘀證的臨床治療并取得良好療效。芍藥苷、川芎嗪分別是赤芍、川芎的有效部位，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其均具有較好的保護(hù)血管內(nèi)皮、抑制血小板聚集活化、抗動(dòng)脈粥樣硬化以及防治冠心病介入術(shù)后支架再狹窄等作用。那么，其保護(hù)血管內(nèi)

4、皮功能、抗血小板聚集活化的作用是否與調(diào)控PKCβ1基因有關(guān)？其在波動(dòng)性高血糖繼發(fā)血管病變效應(yīng)中是否也發(fā)揮重要作用呢？
　　本研究通過納入2型糖尿病患者，觀察血糖波動(dòng)幅度與2型糖尿病患者血小板活化、血管內(nèi)皮損傷及PKCβ1表達(dá)的相關(guān)性;體外構(gòu)建波動(dòng)性高血糖誘導(dǎo)損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃腿搜“濉氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)體系，觀察赤芍川芎有效部位對(duì)波動(dòng)性高血糖損傷血管內(nèi)皮的保護(hù)效應(yīng)以及PKCβ1表達(dá)變化的情況，探討波動(dòng)性高血糖誘導(dǎo)人臍靜

5、脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷培養(yǎng)液溫育對(duì)人外周血血小板聚集的影響以及PKCβ1在其中所扮演的角色;體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過引入“升糖指數(shù)”(Glucose Index，GI)的概念，構(gòu)建2型糖尿病大鼠波動(dòng)性高血糖和穩(wěn)定性高血糖模型，觀察赤芍川芎有效部位對(duì)血糖波動(dòng)狀態(tài)下2型糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能、血小板聚集活化以及冠心病血瘀證關(guān)鍵調(diào)控分子PKCβ1表達(dá)的影響，探討赤芍川芎有效部位拮抗波動(dòng)性高血糖介導(dǎo)內(nèi)皮損傷和血小板過度活化的相關(guān)機(jī)制，為活血化瘀中藥防治糖尿病血

6、管并發(fā)癥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本課題研究包括以下兩部分:文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究。
　　1.文獻(xiàn)綜述:本部分從“糖尿病血管病變、血瘀證與活血化瘀”、“波動(dòng)性高血糖、血管內(nèi)皮損傷與血小板過度活化”和“PKCβ與糖尿病血管病變研究進(jìn)展”三個(gè)方面進(jìn)行綜述。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究:包括以下五個(gè)部分。
　　研究一：2型糖尿病患者血糖波動(dòng)狀態(tài)與血管內(nèi)皮損傷、血小板活化及PKCβ1表達(dá)的相關(guān)性研究
　　目的:明確血糖波動(dòng)狀

7、態(tài)與血管內(nèi)皮損傷、血小板活化及PKCβ1表達(dá)的相關(guān)性。
　　方法:2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)的《中國2型糖尿病防治指南》進(jìn)行。篩選符合入選標(biāo)準(zhǔn)的2型糖尿病患者38例作為研究對(duì)象。在未進(jìn)行藥物干預(yù)措施調(diào)整之前，進(jìn)行七點(diǎn)法指端毛細(xì)血管血糖測(cè)定[三餐前（早餐前（空腹）、午餐前、晚餐前，三餐后2h及睡前9點(diǎn)]來計(jì)算平均血糖波動(dòng)幅度(MAGE);采血測(cè)定外周血血小板最大聚集率和血小板膜蛋白CD62p表達(dá);采用離子

8、交換高壓液相法檢測(cè)糖化血紅蛋白(HbA1c)水平;采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)血清E-選擇素(E-selectin)、血管性血友病因子(vWF)和蛋白激酶Cβ1(PKCβ1)水平;同時(shí)，進(jìn)行其他一般性指標(biāo)檢測(cè)。以HbA1c作為評(píng)價(jià)長期血糖控制的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，MAGE作為評(píng)價(jià)血糖波動(dòng)性的指標(biāo)，并觀察血清E-selectin水平、血清vWF水平、血小板最大聚集率和血小板膜蛋白CD62p表達(dá)分別與血清PKCβ1水平和MAGE以及血清PKC

9、β1水平與MAGE和HbA1c水平之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:入組患者的年齡、體重、病程、病史等一般資料與血清E-selectin、血清vWF、血清PKCβ1、血小板最大聚集率、血小板膜蛋白CD62p表達(dá)和MAGE之間均無顯著相關(guān)性;內(nèi)皮損傷標(biāo)志物血清E-selectin和血清vWF水平、血小板最大聚集率和血小板膜蛋白CD62p表達(dá)與MAGE之間均存在顯著相關(guān)性(P＜0.01);冠心病血瘀證目標(biāo)分子PKCβ1與血糖評(píng)價(jià)指標(biāo)（MAGE

10、和HbA1c）、內(nèi)皮損傷標(biāo)志物（E-selectin和vWF）、血小板最大聚集率和CD62p表達(dá)水平之間均存在顯著相關(guān)性（P＜0.05或P＜0.01），均可以建立回歸方程。
　　結(jié)論:冠心病血瘀證關(guān)鍵調(diào)控分子PKCβ1與糖尿病患者血糖波動(dòng)狀態(tài)下的血管內(nèi)皮損傷程度和血小板活化聚集水平密切相關(guān)。
　　研究二：波動(dòng)性高血糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷過程中PKCβ1表達(dá)及赤芍川芎有效部位的干預(yù)效應(yīng)研究
　　目的:

11、觀察波動(dòng)性高血糖對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷過程中PKCβ1表達(dá)的影響及赤芍川芎有效部位的干預(yù)效應(yīng)。
　　方法:以體外培養(yǎng)HUVECs作為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)共分為以下9組:正常低糖組（N組）:以低糖型DMEM(5.56mmol/L)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每24 h更換一次培養(yǎng)基;穩(wěn)定性高糖組（W組）:以高糖型（25mmol/L）DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每24h更換一次培養(yǎng)基;波動(dòng)性高糖組（B組）:以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培

12、養(yǎng)，每24h交替更換一次;穩(wěn)定性高糖+LY333531組（WL組）:采用PKCβ1阻斷劑LY333531預(yù)處理1h后，以高糖型DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每24h更換一次培養(yǎng)基;波動(dòng)性高糖+LY333531組（BL組）:采用PKCβ1阻斷劑LY333531預(yù)處理1h后，以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交替更換一次;波動(dòng)性高糖+川芎嗪組（TMP組）:以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交

13、替更換一次，并應(yīng)用鹽酸川芎嗪(TMP，500μM)進(jìn)行干預(yù);波動(dòng)性高糖+芍藥苷組（PAE組）:以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交替更換一次，并應(yīng)用芍藥苷（PAE，100μM）進(jìn)行干預(yù);波動(dòng)性高糖+鹽酸二甲雙胍組(MH組):以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交替更換一次，并應(yīng)用鹽酸二甲雙胍（MH，1mM）進(jìn)行干預(yù);波動(dòng)性高糖+阿司匹林組（ASA組）:以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型

14、DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交替更換一次，并應(yīng)用阿司匹林(ASA，1mM)進(jìn)行干預(yù)。細(xì)胞培養(yǎng)8d，采用倒置相差顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞活性和凋亡。收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α[(TNF-α)、血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)、活性氧(ROS)含量和總抗氧化能力(T-AOC);應(yīng)用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞PKCβ1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.細(xì)胞形

15、態(tài)學(xué)觀察:與N組相比，W組和B組細(xì)胞明顯腫脹、凋亡和壞死，且B組較W組更顯著。應(yīng)用LY333531抑制PKCβ1表達(dá)后細(xì)胞狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)。應(yīng)用TMP、PAE、MH和ASA干預(yù)后，細(xì)胞狀態(tài)較B組均有不同程度改善。
　　2.細(xì)胞活性和凋亡水平檢測(cè):與N組相比，B組和W組細(xì)胞活性顯著下降、細(xì)胞總凋亡率（以晚期凋亡為主）明顯升高(P＜0.01)，且B組較W組更顯著(P＜0.05或P＜0.01)。應(yīng)用LY333531阻斷后，WL組和BL組細(xì)胞

16、總凋亡率均顯著下降（P＜0.05或P＜0.01）;TMP、PAE、MH和ASA干預(yù)亦可顯著降低細(xì)胞的總凋亡率(P＜0.01)，其中PAE對(duì)早期凋亡(P＜0.01)和晚期凋亡(P＜0.01)均具有顯著抑制效應(yīng)。
　　3.炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)檢測(cè):與N組相比，W組和B組細(xì)胞TNF-α、PECAM-1、ROS含量均顯著增多(P＜0.01)，T-AOC顯著下降(P＜0.01);與W組比較，B組細(xì)胞TNF-α、PECAM-1含量又有進(jìn)

17、一步升高(P＜0.01，P＜0.05)，T-AOC進(jìn)一步降低(P＜0.01);應(yīng)用LY333531阻斷后，WL組和BL組細(xì)胞TNF-α、PECAM-1、ROS水平出現(xiàn)顯著下降（P＜0.05或P＜0.01），同時(shí)伴T-AOC顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）;TMP、PAE、MH和ASP干預(yù)與LY333531效應(yīng)相似。
　　4.細(xì)胞PKCβ1蛋白水平檢測(cè):與N組相比，W組和B組細(xì)胞PKCβ1蛋白表達(dá)均顯著升高（P＜0.05或P＜

18、0.01），B組較W組又出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05);應(yīng)用LY333531阻斷后，WL組和BL組細(xì)胞PKCβ1蛋白表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01);TMP、PAE、MH和ASA干預(yù)與LY333531具有相似效應(yīng)。
　　結(jié)論:波動(dòng)性高血糖能夠顯著誘導(dǎo)并加重人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷和凋亡，且該效應(yīng)與PKCβ1過表達(dá)密切相關(guān);赤芍川芎有效部位對(duì)波動(dòng)性高血糖狀態(tài)下的血管內(nèi)皮功能損傷具有明顯的保護(hù)作用，該作用機(jī)制與其顯著抑制PKCβ1表達(dá)進(jìn)而減

19、輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。
　　研究三：波動(dòng)性高血糖對(duì)人血小板聚集活化的影響及赤芍川芎有效部位和PKCβ1抑制的干預(yù)效應(yīng)研究
　　目的:觀察波動(dòng)性高血糖對(duì)人血小板聚集活化的影響及赤芍川芎有效部位和PKCβ1抑制的干預(yù)效應(yīng)。
　　方法:首先，予人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞以不同條件葡萄糖進(jìn)行培養(yǎng):正常低糖組(N組):以低糖型DMEM(5.56mmol/L)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每24 h更換一次培養(yǎng)基;穩(wěn)定性高糖組（W組）:以高糖型(

20、25mmol/L) DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每24h更換一次培養(yǎng)基;波動(dòng)性高糖組（B組）:以低糖型DMEM全培養(yǎng)基/高糖型DMEM全培養(yǎng)基培養(yǎng)，每24h交替更換一次。連續(xù)培養(yǎng)8d后，收集細(xì)胞上清液，置于-80℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆?。其次，選取健康志愿者15例，于清晨進(jìn)食前使用BD枸櫞酸鈉抗凝(1∶9)真空采血管采集10mL空腹全血，以1000r/min離心10min收集富血小板血漿（PRP），3000r/min離心10min，提取貧血小板血漿

21、(PPP)。最后，將第一步收集到的不同培養(yǎng)條件培養(yǎng)的細(xì)胞上清液作為誘導(dǎo)劑加入收集到的PRP中進(jìn)行血小板最大聚集率的檢測(cè)。同時(shí)，應(yīng)用PKCβ1阻斷劑LY333531以及TMP、PAE、MH和ASA對(duì)不同組血小板進(jìn)行預(yù)處理15min。實(shí)驗(yàn)共計(jì)分為以下9組:正常低糖組（N組）、穩(wěn)定性高糖組（W組）、穩(wěn)定性高糖+LY333531組（WL組）、波動(dòng)性高糖組（B組）、波動(dòng)性高糖+LY333531組（BL組）、波動(dòng)性高糖+川芎嗪組（TMP組）、波動(dòng)性

22、高糖+芍藥苷組（PAE組）、波動(dòng)性高糖+二甲雙胍組（MH組）和波動(dòng)性高糖+阿司匹林組（ASA組）。
　　結(jié)果:與N組相比，W組和B組健康人外周血血小板最大聚集率均明顯增高(P＜0.01)，且B組較W組又有顯著升高(P＜0.01);而應(yīng)用PKCβ1阻斷劑LY333531以及TMP、PAE、MH和ASA藥物預(yù)處理15min后，波動(dòng)高糖誘導(dǎo)的血小板最大聚集率均顯著下降(P＜0.01)。
　　結(jié)論:波動(dòng)性高血糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮損傷培

23、養(yǎng)液溫育具有顯著促進(jìn)健康人血小板聚集的作用，PKCβ1抑制劑及赤芍川芎有效部位對(duì)此均具有顯著的拮抗效應(yīng)，赤芍川芎有效部位的抗血小板聚集效應(yīng)可能與其抑制PKCβ1表達(dá)相關(guān)。
　　研究四：2型糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型的建立
　　目的:建立2型糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型。
　　方法:SD大鼠30只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，開始高糖高脂喂養(yǎng)，喂食方式采用定時(shí)定點(diǎn)投食，每日8:00-9:00、14:00-15:00和20:00-21

24、:00共計(jì)三次，每次持續(xù)1h。4w后，按30 mg/kg劑量一次性予以腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，使用檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液進(jìn)行配制，pH4.4)，STZ注射3d后連續(xù)測(cè)定造模大鼠空腹和餐后血糖，以空腹血糖大于11.1mmol/L且餐后血糖不大于33.3mmol/L作為入組標(biāo)準(zhǔn)，成功納入符合要求的2型糖尿病(T2DM)大鼠16只。根據(jù)血糖和體重水平將成功納入的T2DM大鼠分為兩組:高GI飲食組和低GI飲食組。仍采用定時(shí)投食的方法，正常

25、組喂以基礎(chǔ)飼料，高GI組喂以高GI飼料，低GI組喂以低GI飼料。同時(shí)，采用尾靜脈采血法測(cè)定各組大鼠三餐前和餐后2h血糖，連續(xù)測(cè)定5d。實(shí)驗(yàn)完成后，腹主動(dòng)脈采血，分離血清用于空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TC)、胰高血糖素(glucagon)和胰島素(insulin)水平的檢測(cè)并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(Insulin Sensitive Index，ISI)。
　　結(jié)果:
　　1.體重及血清生化指標(biāo):與正常組相比

26、，高GI飲食組和低GI飲食組糖尿病大鼠體重以及血清FBG、TC和TG水平均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），且兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.血清glucagon、insulin和ISI水平:與正常組相比，高GI飲食組（波動(dòng)組）和低GI飲食組（穩(wěn)定組）大鼠血清glucagon和insulin水平均顯著升高，ISI顯著降低(P＜0.01)，且兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.血糖波動(dòng)情況:與

27、正常組相比，高GI飲食組和低GI飲食組糖尿病大鼠MAGE和最大血糖波動(dòng)幅度(LAGE)均出現(xiàn)較大幅度升高(P＜0.01);與低GI飲食組比較，高GI飲食組MAGE和LAGE的增高幅度更為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　結(jié)論:在不影響大鼠整體血糖水平的情況下，高GI飲食組糖尿病大鼠比低GI飲食組大鼠具有更加明顯的血糖波動(dòng)。運(yùn)用高GI飲食和低GI飲食喂養(yǎng)2型糖尿病大鼠可以成功構(gòu)建2型糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型，且該模型可保證2型

28、糖尿病大鼠血糖相對(duì)穩(wěn)定。
　　研究五：赤芍川芎有效部位對(duì)波動(dòng)性高血糖大鼠血管內(nèi)皮損傷過程中血小板活化及PKCβ1表達(dá)的影響
　　目的:觀察波動(dòng)性高血糖大鼠血管內(nèi)皮損傷過程中血小板活化及PKCβ1表達(dá)情況及赤芍川芎有效部位的干預(yù)效應(yīng)。
　　方法:SD大鼠100只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2w后，隨機(jī)選取10只作為正常對(duì)照組（N組）。余下90只大鼠進(jìn)行高糖高脂飼料喂食，喂食方式采用定時(shí)定點(diǎn)投食(每日8:00-9:00、14:00

29、-15:00、20:00-21:00共計(jì)三次，每次持續(xù)1h)。4w后按30mg/kg劑量一次性經(jīng)腹腔注射STZ，3d后連續(xù)測(cè)定模型大鼠空腹和餐后2h血糖，以空腹血糖大于11.1mmol/L且餐后血糖不大于33.3mmol/L作為入選標(biāo)準(zhǔn)，成功納入符合要求的2型糖尿病大鼠62只。根據(jù)大鼠平均血糖和體重將成功納入的2型糖尿病大鼠分為以下6組:穩(wěn)定高糖組（W組，11只）:每日定時(shí)喂食低GI飼料;波動(dòng)高糖組（B組，11只）:每日定時(shí)喂食高GI飼

30、料;波動(dòng)高糖+二甲雙胍組（MH組，10只）:每日定時(shí)喂食高GI飼料，并按150mg/kg/d灌服鹽酸二甲雙胍混懸液;波動(dòng)高糖+阿司匹林組(ASA組，10只):每日定時(shí)喂食高GI飼料，并按60mg/kg/d灌服阿司匹林腸溶片混懸液;波動(dòng)高糖+川芎嗪組（TMP組，10只）:每日定時(shí)喂食高GI飼料，并按100mg/kg/d灌服鹽酸川芎嗪混懸液;波動(dòng)高糖+芍藥苷組（PAE組，10只）:每日定時(shí)喂食高GI飼料，并按10mg/kg/d灌服芍藥苷混懸

31、液。正常組（N組，10只）:每日定時(shí)喂食基礎(chǔ)飼料，并灌服等體積蒸餾水。藥物干預(yù)6w后，所有大鼠禁食12h，腹主動(dòng)脈采血，部分血液分離血清后用于進(jìn)行生化檢測(cè)，部分置于抗凝管中用于血小板蛋白提取和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。分離大鼠腹主動(dòng)脈和胸主動(dòng)脈，取上端2cm，將其固定于20％甲醛中進(jìn)行切片及蘇木素-伊紅(H&E)染色用于組織形態(tài)學(xué)觀察，其余部分液氮迅速凍存后置于-80℃冰箱保存，用于主動(dòng)脈PKCβ1蛋白表達(dá)檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1.

32、主動(dòng)脈病理結(jié)果:與N組相比，W組和B組主動(dòng)脈組織出現(xiàn)了明顯的紊亂、損傷以及早期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊征象，且B組損傷程度更為嚴(yán)重;與B組相比，TMP組、PAE組、MH組和ASA組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮組織結(jié)構(gòu)及狀態(tài)均有不同程度改善。
　　2.體重和血清生化指標(biāo):與N組相比，W組和B組糖尿病大鼠血清FBG、TC、TG水平均出現(xiàn)明顯增高(P＜0.01)，大鼠體重與insulin水平出現(xiàn)顯著降低(P＜0.01);但W組與B組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞

33、0.05)。與B組相比，TMP組、PAE組和MH組大鼠血清FBG、TC、TG水平均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），同時(shí)insulin顯著增加(P＜0.01)，ASA組則無顯著變化。
　　3.炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo):與N組相比，W組和B組糖尿病大鼠血清vWF、E-selectin和ROS含量均顯著增多(P＜0.01)，SOD和T-AOC水平顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），且B組與W組之間具有顯著差異(P＜0.05

34、或P＜0.01)。與B組相比，TMP組、PAE組、MH組和ASA組大鼠血清vWF、E-selectin、ROS含量不同程度下降（P＜0.05或P＜0.01），同時(shí)伴有SOD和T-AOC水平明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。
　　4.血小板膜蛋白CD62p水平:與N組相比，W組和B組大鼠血小板膜糖蛋白CD62p水平均顯著增加(P＜0.01)，且B組與W組之間具有顯著差異(P＜0.05)。與B組相比，TMP組、PAE組、MH組和

35、ASA組大鼠血小板膜蛋白CD62p表達(dá)均有不同程度降低（P＜0.05或P＜0.01）。
　　5.血清、血小板及主動(dòng)脈PKCβ1蛋白表達(dá):與N組相比，W組和B組大鼠血清PKCβ1、主動(dòng)脈及血小板PKCβ1蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），且B組與W組之間具有顯著差異(P＜0.05或P＜0.01)。與B組相比，TMP組、PAE組和MH組大鼠血清、主動(dòng)脈和血小板PKCβ1蛋白表達(dá)均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01);