Neuroligin1基因在Wistar大鼠胚胎腸神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:腸道神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric Nervous System，ENS)相關(guān)的一系列疾病一直以來(lái)都是醫(yī)學(xué)界的難題，它們的影響因素眾多，表現(xiàn)形式各樣，病因往往都不是非常明確，而且，近些年ENS疾病發(fā)病率呈現(xiàn)出增長(zhǎng)趨勢(shì)，即使有些腸道神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病可以通過(guò)外科手術(shù)的方式得到治療，但它們的術(shù)后并發(fā)癥或術(shù)后恢復(fù)情況仍會(huì)受到許多不明病因的影響，這些不被詳知的病因一直以來(lái)都是我們研究的對(duì)象。Neuroligin1基因廣泛存在于人類(lèi)和其它哺乳動(dòng)物的

2、體內(nèi)，且在ENS內(nèi)廣泛表達(dá)，同時(shí)也發(fā)揮著重要的作用，我們此次科研的目的就是研究Neuroligin1基因在Wistar大鼠胚胎的ENS中的表達(dá)情況，探討Neuroligin1基因的表達(dá)與ENS和ENS疾病之間的關(guān)系。
　　方法:分別取Wistar大鼠的胚胎第16(E16)、18(E18)、20(E20)天和出生第一天(B1)的胚鼠腸管標(biāo)本各30只，分別通過(guò)免疫熒光兩重標(biāo)記的染色技術(shù)、Western blot的技術(shù)、多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒?/p>

3、應(yīng)（實(shí)時(shí)熒光定量的）的實(shí)驗(yàn)技術(shù)（Real-time Quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附的實(shí)驗(yàn)技術(shù)(ELISA)、免疫組織化學(xué)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)(immunohistochemistry)等實(shí)驗(yàn)方法，研究Neuroligin1基因在Wistar大鼠胚胎ENS各個(gè)發(fā)育時(shí)期中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:在Wistar大鼠E16、E18、E20和B1四個(gè)ENS發(fā)育時(shí)期中:免疫熒

4、光兩重標(biāo)記的染色技術(shù)顯示Neuroligin1基因陽(yáng)性面積的平均光密度值分別為E16(0.046±0.031),E18(0.146±0.033),E20(0.233±0.034),B1(0.345±0.344)，且四組之間的差別經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（F=441.614，P=0.000，P＜0.05)，同時(shí)在組組相比的過(guò)程中，平均蛋白濃度均有差別且經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（比較結(jié)果都符合P=0.000，P＜0.05）;Western

5、blot顯示Neuroligin1基因的平均蛋白表達(dá)量分別為E16(0.053±0.025)、E18(0.146±0.024)、E20(0.249±0.034)、B1(0.533±0.049)，且四組之間的差別經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（F=1070.296，P=0.000，P＜0.05），同時(shí)在組組相比的過(guò)程中，平均蛋白濃度均有差別且經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（比較結(jié)果都符合p=0.000，p＜0.05）;qRT-PCR顯示Neuroli

6、gin1基因的mRNA相對(duì)平均濃度分別為E16(2.543±1.294)、E18(4.637±1.830)、E20(6.814±1.552)、B1(8.345±1.364)，且四組之間的差別經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義(F=81.440，P=0.000，P＜0.05)，同時(shí)在組組相比的過(guò)程中，平均mRNA濃度均有差別且經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（比較結(jié)果都符合p=0.000，p＜0.05）;ELISA顯示Neuroligin1基因表達(dá)的蛋白平

7、均濃度分別為E16(0.069±0.061)、E18(0.153±0.102)、E20(1.087±0.093)、B1(1.678±0.085)，且四組之間的差別經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義（F=2396.068，p=0.000，P＜0.05），同時(shí)在組組相比的過(guò)程中，平均蛋白濃度均有差別且經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件處理證實(shí)有意義(比較結(jié)果都符合p=0.000，p＜0.05);免疫組織化學(xué)技術(shù)顯示Neuroligin1基因表達(dá)的蛋白分別為E16(±～+)、

8、E18(+～++)、E20(++～+++)、B1(+++～++++)，表達(dá)量的大小順序?yàn)?E16＜E18＜E20＜B1;免疫熒光兩重標(biāo)記的染色技術(shù)、Western blot、qRT-PCR、ELISA和免疫組織化學(xué)技術(shù)中Neuroligin1基因的表達(dá)趨勢(shì)彼此一致。
　　結(jié)論:在E16到B1這段時(shí)期內(nèi)，隨著Wistar大鼠ENS的發(fā)育，Neuroligin1在ENS的表達(dá)呈遞增趨勢(shì);Neuroligin1在ENS的異常表達(dá)發(fā)生越早