半夏瀉心湯對(duì)糖尿病大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞、腸神經(jīng)系統(tǒng)及CBS的影響.pdf

1、目的：
　　探討半夏瀉心湯對(duì)糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal,ICC)、腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system,ENS)以及胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.糖尿病大鼠模型誘導(dǎo)將60只健康雄性SD大鼠設(shè)為正常對(duì)照組、

2、糖尿病模型組(DM模型組)、半夏瀉心湯組(中藥組)和多潘立酮組(西藥組)。除正常對(duì)照組外,所有大鼠行一次性腹腔注射(ip)鏈脲佐菌素(STZ,55 mg/kg)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。所有糖尿病大鼠飼養(yǎng)6周后再選取成功模型。
　　2.干預(yù)方法中藥組每天給予半夏瀉心湯[5.4 g/(kg.d)]灌胃,西藥組每天給予多潘立酮[5 mg/(kg.d)]灌胃,DM模型組及正常對(duì)照組每天給予等量生理鹽水,每天1次,持續(xù)灌胃8周。
　　3.

3、一般情況誘導(dǎo)糖尿病模型成功后觀(guān)察大鼠的飲食、飲水、糞便、毛色及精神狀況,每周測(cè)體重、檢測(cè)鼠尾末端血糖。
　　4.胃殘留率、小腸推進(jìn)率測(cè)定干預(yù)8周后禁食12小時(shí),予預(yù)先調(diào)制的黑色半固體營(yíng)養(yǎng)糊(1 mL/100g)灌胃。30分鐘后注射10％水合氯醛麻醉開(kāi)腹,快速結(jié)扎幽門(mén)和賁門(mén)后取出胃,結(jié)扎幽門(mén)和回盲部,無(wú)張力下分離腸系膜。胃殘留率(%)=(胃總重-胃凈重)/糊重×100%。測(cè)量從幽門(mén)至回盲部的總長(zhǎng)度作為小腸總長(zhǎng)度,從幽門(mén)至營(yíng)養(yǎng)糊黑染所

4、在的距離作為小腸推進(jìn)長(zhǎng)度。小腸推進(jìn)率(%)=營(yíng)養(yǎng)糊推進(jìn)距離(cm)/小腸全長(zhǎng)(cm)×100%。
　　5.免疫組化SP法檢測(cè)胃竇組織c-kit、SCF;空腸組織c-kit、SCF、SYP、PGP9.5、SP、CBS表達(dá)的變化將四組實(shí)驗(yàn)大鼠胃竇、空腸組織標(biāo)本的石蠟切片通過(guò)免疫組化SP法、圖像分析觀(guān)察胃竇ICC及腸神經(jīng)叢、CBS陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的分布及變化。
　　6.Western blot檢測(cè)空腸組織c-kit、SCF、CBS蛋白

5、的表達(dá)分別將四組實(shí)驗(yàn)大鼠空腸組織標(biāo)本提取蛋白后行免疫印跡檢測(cè),通過(guò)灰度值對(duì)比檢測(cè)蛋白表達(dá)的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況與正常對(duì)照組比較,DM模型組體重減輕,血糖及胃殘留率升高、小腸推進(jìn)率下降,與DM模型組比較,兩個(gè)用藥組多飲、多食及多尿癥狀減輕,精神狀態(tài)好轉(zhuǎn),體重明顯增加(P<0.05),胃殘留率降低(P<0.05),小腸推進(jìn)率增加(P<0.05),中藥組血糖降低較DM模型組降低(P<0.05)。
　　2.

6、各組大鼠胃竇與空腸組織c-kit與SCF的免疫組化結(jié)果與正常對(duì)照組比較,DM模型組大鼠胃竇、空腸c-kit及SCF平均光密度值顯著降低(P<0.05),與模型組比較,兩個(gè)用藥組胃竇及空腸c-kit及SCF平均光密度值明顯增加(P<0.05),且中藥組胃竇c-kit平均光密度高于西藥組(P<0.05)。
　　3.各組大鼠空腸組織CBS的免疫組化結(jié)果與正常對(duì)照組相比,糖尿病大鼠空腸CBS光密度值升高(P<0.05),兩個(gè)用藥組較DM模

7、型組CBS光密度值降低(P<0.05)。中藥組與西藥組之間CBS光密度值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4.各組大鼠空腸組織SYP、PGP9.5、SP的免疫組化結(jié)果 DM模型組SYP、PGP9.5、SP平均陽(yáng)性產(chǎn)物面積和吸光度值較正常對(duì)照組明顯減少(P<0.05),中藥組、西藥組SYP、PGP9.5、SP陽(yáng)性產(chǎn)物面積和平均吸光度值較DM模型組顯著增加(P<0.05),但仍低于正常對(duì)照組(P<0.05)。
　　5.各組大鼠

8、空腸Western Blot法測(cè)定c-kit、SCF蛋白、CBS蛋白的表達(dá)結(jié)果中藥組與西藥組的c-kit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)明顯高于DM模型組(P<0.05),但低于正常對(duì)照組(P<0.05);中藥組與西藥組之間c-kit蛋白及 SCF蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。DM模型組CBS蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組大鼠明顯上升(P>0.05),兩用藥組CBS蛋白表達(dá)較DM模型組降低,較正常對(duì)照組CBS蛋白表達(dá)增高(P<0.05)。
　

9、　結(jié)論：
　　1.糖尿病大鼠存在胃排空延遲和腸推進(jìn)速率下降。
　　2.半夏瀉心湯促進(jìn)糖尿病大鼠c-kit及SCF表達(dá),降低CBS的表達(dá),提示對(duì)受損的胃竇ICC及氣體遞質(zhì)H2S有一定程度逆轉(zhuǎn)的作用,從而在一定程度上改善糖尿病大鼠的胃動(dòng)力障礙。
　　3.半夏瀉心湯促進(jìn)糖尿病大鼠空腸肌間神經(jīng)叢SYP、PGP9.5和SP的表達(dá),提示對(duì)受損的糖尿病大鼠小腸肌間神經(jīng)叢有一定程度的修復(fù)作用。
　　4.糖尿病大鼠空腸CBS的表達(dá)