長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃動力及Cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分糖尿病大鼠胃排空和Cajal間質(zhì)細(xì)胞的改變
　　目的：以糖尿病大鼠為模型，研究糖尿病狀態(tài)下胃排空和胃竇Cajal間質(zhì)細(xì)胞的改變。
　　方法：取雄性Sprague Dawley大鼠12只，通過隨機(jī)化分組分為兩組：糖尿病組（DM group, n=6），通過腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin,STZ,60mg/kg）建立糖尿病模型；正常對照組（normal control group, n=6）。在造模前、

2、成模后以及第2、4、6周記錄每只大鼠的體重和血糖。在第6周末應(yīng)用酚紅餐法檢測大鼠胃排空改變；使用透射電鏡技術(shù)觀察Cajal間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；應(yīng)用Western blot、免疫熒光法用來評估胃竇c-kit的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）造模前糖尿病組與正常對照組大鼠體重?zé)o顯著差異。成模后第2、4、6周，糖尿病組大鼠體重與正常對照組相比均明顯下降；（2）造模前兩組大鼠之間血糖水平無顯著差異。成模后以及第2、4、6周，糖尿病組血糖水平

3、與正常組相比均明顯升高；（3）糖尿病組大鼠相對于正常組胃排空明顯延遲((55.89±3.32)％ vs(76.55±2.36)%,(P=0.0005)；（4）Western blot結(jié)果：糖尿病組胃竇組織c-kit蛋白表達(dá)水平與正常組相比顯著降低；（5）免疫熒光檢測糖尿病組胃竇c-kit+細(xì)胞數(shù)目與正常組相比明顯減少；（6）糖尿病組大鼠Cajal間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)示細(xì)胞器數(shù)量減少，線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹明顯。
　　結(jié)論：糖尿病大鼠與正常

4、大鼠相比胃排空明顯延遲，Cajal間質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損、數(shù)量減少。
　　第二部分 IGF-1通路及其他ICC相關(guān)調(diào)節(jié)因素對糖尿病大鼠ICC改變的影響
　　目的：通過糖尿病胃輕癱大鼠為模型，研究IGF-1通路及其他ICC相關(guān)調(diào)節(jié)因素對糖尿病胃輕癱大鼠ICC改變的影響。
　　方法：通過免疫印跡法測定胃竇組織中 c-kit、SCF、IGF-1R以及其它相關(guān)調(diào)節(jié)因素5-HT2B、nNOS蛋白的表達(dá)；采用免疫熒光技術(shù)檢測c-kit+

5、細(xì)胞和IGF-1R的表達(dá)；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清中IGF-1水平;通過透射電子顯微鏡技術(shù)觀測ICC超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果：（1）免疫印跡法結(jié)果顯示，糖尿病組胃竇組織 c-kit/SCF、IGF-1R蛋白以及5-HT2B、nNOS蛋白表達(dá)水平與正常對照組相比均明顯下降；（2）免疫熒光結(jié)果顯示糖尿病組大鼠胃竇 c-kit+細(xì)胞數(shù)目減少，IGF-1R受體表達(dá)減少；（3）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示糖尿病組大鼠血清中IGF-1水平較正常

6、對照組顯著降低。
　　結(jié)論：糖尿病胃輕癱大鼠 SCF/c-kit以及 IGF-1信號通路表達(dá)下調(diào)，5-HT2B及 nNOS表達(dá)降低，并可能參與ICC缺失與損傷。
　　第三部分長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃動力和Cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究
　　目的：通過糖尿病胃輕癱大鼠為模型，研究IGF-1在胃電刺激GES修復(fù)糖尿病大鼠胃竇ICC中的作用。
　　方法：通過透射電鏡檢測ICC超微結(jié)構(gòu)的改變；應(yīng)用免疫印跡法測定

7、胃竇組織中c-kit、SCF、IGF-1受體蛋白的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光法檢測ICC細(xì)胞和IGF-1受體的表達(dá)；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清中IGF-1水平變化。
　　結(jié)果：（1）成模前各組大鼠的血糖值無明顯差異；成模后和第2周、4周和6周，真性及假性刺激組均與糖尿病組無明顯差異；（2）成模前各組大鼠間體重?zé)o顯著差異；成模后和第2周、4周，真性刺激組體重與糖尿病組相比無明顯增加；但在成模后第6周，真性刺激各組大鼠體重與糖尿病組相比有顯

8、著差異；（3）糖尿病組胃排空較正常組明顯延遲，予以3種參數(shù)胃電刺激后胃排空均有顯著改善，其中GES2刺激效果最為顯著；（4）免疫印跡法結(jié)果顯示予以真性胃電刺激后，c-kit、SCF、IGF-1R蛋白表達(dá)水平較糖尿病組均有明顯增加；（5）免疫熒光結(jié)果顯示予以真性胃電刺激后c-kit+細(xì)胞數(shù)目增多，IGF-1R受體增多；（6）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)顯示真性胃電刺激后各組大鼠血清中IGF-1水平較糖尿病組顯著升高；（7）真性胃電刺激組ICC細(xì)胞超微