定向遷移細胞前沿Rac局部化激活的調控機制——Paxillin-GIT1-PIX信號轉導通路調節(jié)RAC蛋白激活及細胞遷移.pdf

1、在細胞運動中激活Rac蛋白，其表現出很強的時間性和空間性，故在細胞前端產生扁平突起—片狀足。繼而使細胞產生運動牽拉胞體的過程。但對于正調控Rac蛋白局部化激活的原理到目前為止尚未定論。我們已知根據在細胞兩端及其后端當整合素α4處于激活狀態(tài)時，則抑制Rac蛋白的活性。并根據信號分子的結構及其功能提出了整合素正調控Rac蛋白活性的信號轉導通路，即當α4胞內區(qū)域磷酸化導致其不能與Paxillin結合時，Paxillin、GIT1，與PIX、P

2、AK形成信號分子復合物。由于PIX為Rac的轉換分子，PAK為Rac的效應分子，構成了Paxillin-GIT1-PIX-PAK信號轉導通路，在細胞前端Rac蛋白處于激活狀態(tài)時就會導致無細胞器的扇形突起—片狀足的形成，從而使細胞向前移動。
　　我們利用Western blotting技術，熒光雙定位技術，已經驗證GIT1可與Paxillin相互作用、GIT1可與PIX相互作用、GIT1可與PAK相互作用，則確認Paxillin-G

3、IT1-PIX-PAK信號分子復合物存在于細胞前端。我們設計、克隆了Paxillin的ShRNA，以降低細胞中Paxillin的表達。免疫熒光試驗表明，在轉染了shRNA中，Paxillin明顯受到抑制。Rac蛋白激活試驗表明，fibronectin刺激5min，Rac蛋白的激活程度最強。FRET定量檢測，驗證了該信號轉導通路在Paxillin正?；蚴芤种魄闆r下Rac的激活。研究結果表明，在Paxillin表達受到抑制時，Rac蛋白激活