細(xì)胞色素C的變化在重癥急性胰腺炎PMN線粒體凋亡途徑異常中的意義及中西醫(yī)結(jié)合治療.pdf

1、背景和目的：重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)發(fā)病急、病情進(jìn)展快，在發(fā)病早期可伴全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，進(jìn)而發(fā)展至多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，致使其病死率居高不下。SIRS是SAP發(fā)展至MODS的前期表現(xiàn)，也是SAP惡化的常見(jiàn)病因。

2、
　　 中性粒細(xì)胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)是人體免疫防御系統(tǒng)的第一道防線，在炎癥的發(fā)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用。PMN在血液循環(huán)中的生命周期很短，達(dá)到生命周期的PMN以凋亡的方式被巨噬細(xì)胞識(shí)別、吞噬而清除。然而PMN的凋亡障礙會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)發(fā)展和加劇，大量凋亡延遲的PMN聚集于炎癥部位并釋放細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)和細(xì)胞毒性內(nèi)容物，從而造成組織損傷，導(dǎo)致SIRS并加重SAP。細(xì)胞色素C是第一種

3、被發(fā)現(xiàn)的由線粒體內(nèi)膜釋放的促凋亡蛋白，在細(xì)胞凋亡中起重要作用。在凋亡信號(hào)的刺激下，細(xì)胞色素C從線粒體釋放至胞質(zhì)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過(guò)研究外周血PMN線粒體內(nèi)膜蛋白細(xì)胞色素C在細(xì)胞凋亡中的表達(dá)變化，可揭示細(xì)胞色素C與PMN凋亡延遲的部分具體機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)旨在研究在SAP所致的SIRS大鼠模型中，PMN細(xì)胞色素C的表達(dá)變化，并進(jìn)一步討論中藥大承氣湯和西藥地塞米松對(duì)SAP的治療作用和部分機(jī)制。
　　 方法：經(jīng)膽胰管逆行注入1.5％去氧

4、膽酸鈉溶液制備大鼠SAP的模型[5.6]。將75只Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(SO)組、重癥急性胰腺炎SIRS(SIRS)組、地塞米松(DEX)組、大承氣湯(DCQT)組以及地塞米松和大承氣湯聯(lián)合用藥(ZXY)組。SO組和SIRS組以生理鹽水灌胃（劑量1ml/100g）；DEX組以地塞米松經(jīng)腹腔內(nèi)注射給藥(劑量1mg/100g);DCQT組以大承氣湯灌胃(劑量1mg/100g)，ZXY組聯(lián)合用藥。各治療組于造

5、模后2小時(shí)和12小時(shí)分別給藥一次。24h后采集外周血分離血清和PMN，并取胰腺標(biāo)本做病理。
　　 光鏡下觀察各組胰腺標(biāo)本病理改變，進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分；測(cè)定血清淀粉酶含量并用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)（ELISA法）檢測(cè)血清IL-6的表達(dá)水平；應(yīng)用Western-Blot技術(shù)定量檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組蛋白細(xì)胞色素C的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1．各實(shí)驗(yàn)組光鏡下胰腺標(biāo)本病理改變：與SO組比較，SIRS組具有顯著性病理改變（水腫

6、：1.90±0.06vs0.70±0.12、炎癥：1.80±0.11vs0.05±0.03、出血：1.95±0.06vs0、壞死：2.85±0.09vs0、空泡形成：2.20±0.10vs0，P＜0.01）；與SIRS組比較，各治療組均有不同程度的病理改善，且具有明顯差異(P＜0.05)，其中ZXY組與SIRS組比較具有顯著性差異（水腫：1.30±0.06vs1.90±0.06、炎癥：1.20±0.01vs1.80±0.11、出血：0.

7、80±0.04vs1.95±0.06、壞死：2.00±0.05vs2.85±0.09、空泡形成：1.30±0.08vs2.20±0.10，P＜0.01)。
　　 2．各實(shí)驗(yàn)組血清淀粉酶含量和炎性介質(zhì)IL-6水平的測(cè)定:
　　 (1)與SO組比較，SIRS組淀粉酶和IL-6水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)：
　　 (2)與SIRS組比較，各治療組淀粉酶和IL-6水平明顯下調(diào)，有顯著性差異(P＜0.01)：

8、
　　 (3)各治療組間比較：與DEX組和DCQT比較，ZXY組淀粉酶和IL-6水平下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01):DEX組與DCQT組比較，淀粉酶和IL-6水平變化不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3．各實(shí)驗(yàn)組大鼠PMN線粒體蛋白細(xì)胞色素C表達(dá)水平的比較：
　　 (1)與SO組比較，SIRS組細(xì)胞色素C表達(dá)水平明顯減少，且具有顯著性差異（0.41±0.01vs2.28±0.30，P＜0.01）；
　　

9、(2)與SIRS組比較，DEX組和DCQT組均具有不同程度的細(xì)胞色素C表達(dá)水平上調(diào)，且具有差異性(P＜0.05)。其中ZXY組與SIRS組比較，具有顯著性差異（2.20±0.27vs0.41±0.01，P＜0.01）；
　　 (3)各治療組間比較：與DEX組和DCQT組比較，ZXY組細(xì)胞色素C表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.05);DEX組與DCQT組比較，細(xì)胞色素C表達(dá)變化不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：較SO組，SIR

10、S組胰腺病理改變程度最嚴(yán)重，而各治療組均有不同程度的改善，但ZXY組病理改善效果最佳，這表明單一用藥對(duì)大鼠胰腺病理改變不如中西藥聯(lián)合應(yīng)用顯著。建立SAP的大鼠模型后，各模型組淀粉酶含量和IL-6明顯升高并且各治療組有相應(yīng)改善，其中ZXY組改善較為明顯。在SIRS組，細(xì)胞色素C的表達(dá)水平顯著下降，與之相比各治療組均有不同程度的上調(diào)，而中西醫(yī)結(jié)合治療對(duì)細(xì)胞色素C表達(dá)水平的提高優(yōu)于單一用藥組，提示當(dāng)SAP時(shí)細(xì)胞色素C表達(dá)水平下降，可能是導(dǎo)致P