新化合物E05對酒精性肝損傷的藥理作用研究.pdf

1、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)為茶葉中含量最豐富、抗氧化活性最強的組分，本論文對EGCG進行結(jié)構(gòu)修飾得到新化合物E05，通過體外細(xì)胞實驗與體內(nèi)動物實驗研究E05對酒精性肝損傷的治療效應(yīng)，并探討其可能的作用機制。
　　 通過MTT法考察酒精對人張氏肝細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明：0.8％、1.6%、3.125%、6.25%、12.5%酒精作用人張氏肝細(xì)胞1h后的抑制率分別為13.55%、17.79%、27.82%、39.68%、

2、57.51%;其中12.5%的酒精作用人張氏肝細(xì)胞1h、2h、4h后的抑制率分別為57.51%、67.12%、80.98%。隨著酒精濃度增加及作用時間延長，酒精對細(xì)胞的增值抑制率上升，酒精對人張氏肝細(xì)胞有毒害作用。
　　 通過MTT法考察E05對酒精損傷人張氏肝細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明：8%的酒精作用肝細(xì)胞4h后，模型組OD值顯著下降(P＜0.001)；與模型組比較，E05各劑量組(1×10-4、5×10-5、2.5×10-5、

3、1.25×10-5mol/L)OD值明顯升高(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。提示E05對人肝細(xì)胞具有保護作用，能提高酒精損傷人肝細(xì)胞的存活率。
　　 通過RT-PCR方法考察E05對酒精損傷人張氏肝細(xì)胞肝纖維化相關(guān)基因ANXA2、PAI-1mRNA表達的影響，結(jié)果表明：酒精損傷模型組ANXA2和PAI-1mRNA表達水平顯著高于正常對照組(P＜0.001)。與模型組相比，E05(2.5×10-5，5×10-5mo

4、l/L)能顯著降低ANXA2mRNA和PAI-1mRNA表達(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。提示E05在酒精性肝纖維化進程中可通過抑制ANXA2、PAI-1基因的表達，增強纖溶酶原激活劑的活性，從而促進細(xì)胞外基質(zhì)降解而起到抗酒精性肝纖維化的作用。
　　 通過建立小鼠急性酒精性肝損傷動物模型，考察E05對急性酒精性肝損傷的保護作用。結(jié)果表明：50%乙醇(0.08ml/10g)灌胃小鼠，每天給予兩次，共10天，可成功

5、建立小鼠急性酒精性肝損傷模型。與模型組比較，E05中劑量(27mg/kg·d-1)能降低血清甘油三酯(TG)含量(P＜0.05)，減少肝組織丙二醛(MDA)的生成(P＜0.05)，提高谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)的活性(P＜0.001)，病理切片顯示E05可改善急性酒精性肝損傷小鼠模型的病理改變。提示E05能夠減輕酒精對脂肪代謝的影響，抑制脂質(zhì)過氧化，誘導(dǎo)肝臟抗氧化酶的活性，增強肝臟清除自由基的能力，對急性酒精性肝損傷起保護作用。<

6、br>　　 通過建立大鼠慢性酒精性肝損傷動物模型，考察E05對慢性酒精性肝損傷的保護作用。結(jié)果表明：采用酒精灌胃(50%乙醇，4g/kg·d-1)，喂養(yǎng)高脂飼料，腹腔注射微量CCl4(25%CCl4-花生油溶液，0.1ml/kg)的方法八周可成功建立慢性酒精性肝損傷大鼠模型。與模型組比較，E05各劑量(6mg/kg·d-1、18mg/kg·d-1、54mg/kg·d-1)可降低血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平(P＜0.01，P＜0.001

7、)，增加血清白蛋白(ALB)含量(P＜0.001)，減少肝組織丙二醛(MDA)的生成(P＜0.01)，E05高劑量(54mg/kg·d-1)可增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P＜0.01)，病理切片顯示E05可改善慢性酒精性肝損傷大鼠模型的病理改變。提示E05能保護肝細(xì)胞，減少轉(zhuǎn)氨酶的釋放，維持肝臟蛋白質(zhì)的正常分泌，提高肝臟抗氧化酶的活性，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成，對慢性酒精性肝損傷起保護作用。
　　 通過急性毒性試驗考察E