一種新型脊髓壓迫動(dòng)物模型的建立及自噬因子beclin1表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　1、建立一種新型的脊髓壓迫動(dòng)物模型；
　　2、通過beclin-1等因子的變化趨勢(shì)探討自噬在脊髓受壓后的發(fā)展過程及規(guī)律；
　　3、研究動(dòng)物脊髓受壓后的影像學(xué)、病理學(xué)變化。
　　方法：
　　將一種吸水后可以發(fā)生體積膨脹的材料植入SD大鼠的C6-C7硬膜外間隙。從而對(duì)SD大鼠脊髓造成壓迫，但是不造成運(yùn)動(dòng)功能障礙。建立一種脊髓受壓但是無運(yùn)動(dòng)功能障礙的新型脊髓壓迫動(dòng)物模型。將30只體重為200g-250

2、gSD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組。首先通過后路手術(shù)暴露SD大鼠頸椎椎板，然后將吸水膨脹材料植入大鼠C6-C7硬膜外間隙。對(duì)照組SD大鼠行假手術(shù)，即不植入吸水膨脹材料。術(shù)后待SD大鼠清醒后觀察其運(yùn)動(dòng)功能，如果出現(xiàn)四肢痙攣、無力、四肢運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)等運(yùn)動(dòng)功能障礙表現(xiàn)時(shí)即表明手術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成急性損傷，隨即淘汰該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并進(jìn)行樣本補(bǔ)充。術(shù)后1天、3天、7天、10天、14天分別處死實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組SD大鼠各3只，進(jìn)行運(yùn)動(dòng)行為學(xué)（BBB評(píng)分）、MRI、

3、HE、TUNEL染色及Beclin-1免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)。觀察上述指標(biāo)在不同時(shí)間段的變化趨勢(shì)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：計(jì)量資料采用樣本均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用配對(duì)T檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組組內(nèi)采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行MRI檢查,結(jié)果表明吸水膨脹材料進(jìn)入C6-C7硬膜外間隙，無脫出及滑移，并造成椎管內(nèi)脊髓壓迫。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組動(dòng)物在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)未出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功

4、能障礙。HE染色顯示實(shí)驗(yàn)組受壓節(jié)段脊髓出現(xiàn)明顯壓跡，神經(jīng)元細(xì)胞變性、空泡樣變。TUNEL凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)從造模后1天開始出現(xiàn)陽性細(xì)胞，對(duì)照組相應(yīng)節(jié)段脊髓則未出現(xiàn)相應(yīng)變化。Beclin-1免疫組化染色檢測(cè)表明:造模后對(duì)照組 Beclin1陽性細(xì)胞有少量表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組Beclin-1陽性細(xì)胞于造模后第1天開始升高，第7天達(dá)到峰值，造模后第14天表達(dá)量與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)所建立的脊髓壓迫動(dòng)物模型