一種新的兔脊髓型頸椎病動(dòng)物模型的建立.pdf

1、目的:本研究的目的是嘗試研制一種新的脊髓壓迫釘用以建立一種帶有典型脊髓型頸椎病(cervical spondylotic myelopathy,CSM)臨床特征的兔實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?這種動(dòng)物模型符合CSM神經(jīng)功能變化及病理變化,并可用于X線(xiàn)、CT、MRI等多種CSM臨床檢查方法及基礎(chǔ)研究。
　　 材料與方法:
　　 1 材料
　　 新西蘭家兔,30只,雄性。由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,普通級(jí);核磁機(jī)由德國(guó)Siemen

2、s公司生產(chǎn)(Siemens Avanto MR);CT機(jī)由德國(guó)Siemens公司生產(chǎn)(SOMATOM Sensation16 CT);X線(xiàn)機(jī)由法國(guó)Trophy公司生產(chǎn)(KODA2200);肌電圖機(jī)由美國(guó)Nicolet公司(VikingQuest);聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、牙膠尖和丁香油均購(gòu)自上海醫(yī)療器械股份有限公司齒科材料廠。氧化鋅購(gòu)自南昌白云藥業(yè)有限公司。
　　 2 方法
　　 (1)應(yīng)用聚甲基丙烯酸甲酯(PMM

3、A)、牙膠尖、氧化鋅和丁香油制備顯影樹(shù)脂脊髓壓迫釘。
　　 (2)動(dòng)物飼養(yǎng)與分組:給予普通實(shí)驗(yàn)室飲食喂養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境溫度為16-20℃。術(shù)前飼養(yǎng)1周。30只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(20只)和對(duì)照組(10只)。實(shí)驗(yàn)組再分為3個(gè)月組(10只)和6個(gè)月組(10只)。
　　 (3)動(dòng)物模型制作:首先腹腔注射地西泮0.5ml,之后腹腔注射速眠新Ⅱ(0.1ml/kg)全身麻醉,備皮。取氣管右側(cè)旁開(kāi)0.5cm,甲狀軟骨下1cm,行縱行切口

4、長(zhǎng)約5cm,逐層分離至椎前,確定C3椎體,于C3椎體前開(kāi)孔直徑約3×3mm,刮出松質(zhì)骨至椎管前壁骨皮質(zhì),將準(zhǔn)備好的顯影樹(shù)脂脊髓壓迫釘輕輕置入孔內(nèi),將肌肉復(fù)位逐層縫合。
　　 (4)神經(jīng)功能觀察:分別于術(shù)前、術(shù)后第一天、術(shù)后3個(gè)月和術(shù)后6個(gè)月采用改良Tarlov's運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估,并記錄。
　　 (5)皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)檢查:與術(shù)前行雙下肢CSEP檢查,觀察圖形振幅并記錄潛伏期P15,術(shù)后立即行C

5、SEP檢測(cè),術(shù)后3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)測(cè)肌電圖并比較振幅以及潛伏期變化。
　　 (6)X線(xiàn)檢查:術(shù)后1個(gè)月行X線(xiàn)檢查,以確定本模型可于X線(xiàn)下清晰顯影,并確定壓迫釘所在位置,壓迫釘與兔頸椎相關(guān)關(guān)系。
　　 (7)CT檢查:術(shù)后1個(gè)月行CT檢查,以確定本模型可行CT檢查,在矢狀位確定壓迫釘位置,壓迫釘與頸椎關(guān)系;在軸位觀察壓迫釘突入椎管深度,并測(cè)量椎管橫徑、矢狀徑以及壓迫釘前端至椎管后壁距離(椎管最短經(jīng)),并計(jì)算椎管平均占用率(椎

6、管占用率=(椎管前后徑-椎管最短徑)/椎管前后徑×100％)。
　　 (8)MR/檢查:術(shù)后3個(gè)月和6個(gè)月分別進(jìn)行MRI平掃,觀察脊髓形態(tài),于T2加權(quán)像軸位觀察脊髓受壓情況,并測(cè)量脊髓前后徑、脊髓橫徑計(jì)算平均脊髓壓迫率(脊髓壓迫率:椎管矢狀徑/橫徑×100％)。于T2加權(quán)像矢狀面脊髓受壓信號(hào)增強(qiáng)最明顯部位或脊髓受壓最嚴(yán)重部位選取興趣區(qū)(面積為0.10 cm2)測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度值,再于C6/7椎體脊髓節(jié)段取興趣區(qū)(面積為0.10cm2

7、)測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度值,計(jì)算并進(jìn)行比值;對(duì)照組則選取C3椎體節(jié)段脊髓和C6/7節(jié)段脊髓測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度值,計(jì)算比值。
　　 (9)光鏡下觀察:分別于3個(gè)月及6個(gè)月處死動(dòng)物,取脊髓受壓階段脊髓,HE染色及DAB染色觀察細(xì)胞變化及脊髓微血管變化。
　　 3 統(tǒng)計(jì)分析
　　 使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0處理數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 (1)計(jì)算CSEP平均潛伏期、CT下平均椎管占用率、MRI下平均脊髓壓迫率。
　

8、　 (2)MRI信號(hào)比、Tarlov's評(píng)分、CSEP潛伏期采用中位數(shù)(PS0)和四分位數(shù)間距(P75-P25)進(jìn)行描述,Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)分析組間差異,采用調(diào)整α水準(zhǔn)(α'=0.0167)后的兩樣本比較Wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較。
　　 結(jié)果:
　　 1 神經(jīng)功能的變化
　　 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后神經(jīng)癥狀最初出現(xiàn)在3個(gè)月內(nèi),6個(gè)月時(shí)運(yùn)動(dòng)功能差異較正常大。對(duì)照組,所有兔神經(jīng)功能均正常,無(wú)任

9、何改變。
　　 2 CSEP
　　 實(shí)驗(yàn)組在行造模手術(shù)前雙下肢CSEP平均潛伏期為16.21±1.7ms,實(shí)驗(yàn)組肌電圖檢查與對(duì)照組比較,體感誘發(fā)電位在波幅與潛伏期上出現(xiàn)顯著變化,并隨時(shí)間加重。對(duì)照組較術(shù)前無(wú)變化。
　　 3 X線(xiàn)檢查
　　 X線(xiàn)檢查可見(jiàn)顯影樹(shù)脂脊髓壓迫釘位于C3椎體,突入椎管,顯影清晰。
　　 4 CT檢查
　　 CT顯像矢狀位及軸位像均可明顯觀察到顯影壓迫釘?shù)乃谖恢谩?/p>

10、迫釘突入椎管位置及大小可清晰觀察。平均椎管占用率為40.2％。
　　 5 MRI檢查
　　 MRI檢查可在軸位像觀察到脊髓壓迫的存在,平均脊髓壓迫率為43.9％。在T2加權(quán)像矢狀位可觀察到受壓區(qū)域出現(xiàn)脊髓高信號(hào),肉眼可觀察到信號(hào)強(qiáng)度明顯高于未受壓區(qū)域及正常脊髓信號(hào),且隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示,脊髓信號(hào)比:對(duì)照組,3個(gè)月實(shí)驗(yàn)組和6個(gè)月實(shí)驗(yàn)組三者總體有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,信號(hào)隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)。
　　 6 病理學(xué)檢

11、　　 壓迫3個(gè)月后的兔脊髓灰質(zhì)神經(jīng)元數(shù)目減少,面積縮小,尼氏體淺染。白質(zhì)有空洞形成,脫髓鞘改變。壓迫6個(gè)月組,脊髓灰質(zhì)前角被壓扁,脊髓前角細(xì)胞消失或壞死,脊髓白質(zhì)成明顯的空泡樣變,軸索變性,脫髓鞘樣改變。DAB染色發(fā)現(xiàn)對(duì)照組血管形態(tài)正常,數(shù)目多。壓迫3個(gè)月組發(fā)現(xiàn)脊髓腹側(cè)受壓處血管減少,灰質(zhì)血管稍多。壓迫6個(gè)月組受壓處血管稀疏,灰質(zhì)有少量血管分布,血管較正常形態(tài)較短且細(xì)。
　　 結(jié)論:
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用特制顯影樹(shù)脂脊髓壓