轉(zhuǎn)錄因子COUP-TFII對(duì)端粒酶催化亞基hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用及意義.pdf

1、端粒酶通過催化端粒合成,保持端粒長(zhǎng)度,從而保證細(xì)胞的持續(xù)分裂能力,其活性與細(xì)胞永生化、腫瘤發(fā)生等過程密切相關(guān).各種生物中端粒酶均至少由三個(gè)單位構(gòu)成,即RNA模板TR、逆轉(zhuǎn)錄催化亞單位TERT和相關(guān)蛋白TLP等.人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄催化亞單位hTERT的mRNA表達(dá)水平與端粒酶的活性有非常明顯的一致性,表明hTERT的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是端粒酶活性調(diào)節(jié)中的限速步驟.hTERT的啟動(dòng)子已經(jīng)被克隆,其主要調(diào)節(jié)區(qū)為結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的看家基因類啟動(dòng)子:無典型的TATA-

2、box結(jié)構(gòu),富含GC,具有多個(gè)Sp1結(jié)合位點(diǎn).近年來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多參與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的相關(guān)因子,其中對(duì)c-Myc的研究最為充分,Sp1和雌激素也有所涉及.另外,p53、WT1、MZF-2和Mad是已知的對(duì)hTERT的轉(zhuǎn)錄起抑制作用的因子.但是,腫瘤細(xì)胞中hTERT基因表達(dá)的詳細(xì)情形仍不明了.為了分離和克隆參與hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子,分析其調(diào)控的分子機(jī)制,并鑒定其對(duì)HeLa細(xì)胞端粒酶活性的生物學(xué)效應(yīng),該研究進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn):1、參

3、與端粒酶催化亞基hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子的分離和克隆.2、COUP-TFII融合蛋白的原核表達(dá)和純化.3、COUP-TFII融合蛋白與hTERT基因啟動(dòng)子的相互作用.四、COUP-TFII在HeLa細(xì)胞中對(duì)hTERT轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響.該研究表明,COUP-TFII作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄抑制因子,通過與hTERT基因啟動(dòng)子相互作用,和c-Myc競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合E-box元件,降低人端粒酶催化亞基hTERT的轉(zhuǎn)錄并相應(yīng)抑制HeLa細(xì)胞端粒酶活性.初步揭示了