艾地苯醌對缺血再灌注視網(wǎng)膜損傷的作用觀察.pdf

1、目的:
　　視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(Retina ischemia-reperfusion injury, RIRI)是臨床上主要致盲性眼病共同的病理生理過程，如青光眼、視網(wǎng)膜中央動脈阻塞、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等。其可通過誘導(dǎo)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)凋亡導(dǎo)致失明，其中線粒體功能障礙引起的氧化應(yīng)激及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)和釋放是重要機(jī)制之一。輔酶Q10是線粒體電子傳遞鏈中必不可少的輔助因子和強(qiáng)效的抗氧化劑，在神經(jīng)退行性疾病中對神經(jīng)元細(xì)胞

2、的氧化應(yīng)激損傷有明顯的保護(hù)作用。艾地苯醌是一種已經(jīng)應(yīng)用于臨床的線粒體功能靶向藥物，與輔酶Q10有類似的醌環(huán)結(jié)構(gòu)，但較輔酶Q10有更強(qiáng)的水溶性，易于被人體所吸收。艾地苯醌在治療腦血管疾病以及遺傳性線粒體功能障礙性疾病中的抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用已經(jīng)得到證實(shí)。本研究通過提高前房灌注壓制作大鼠缺血再灌注模型，艾地苯醌干預(yù)并檢測細(xì)胞色素C(Cytochrome C)、Caspase-3表達(dá)及RGCs計(jì)數(shù)，來探索艾地苯醌在RIRI中的作用，從而為治療

3、青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等RIRI疾病提供新的治療思路。
　　方法:
　　健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:空白對照組，實(shí)驗(yàn)對照組，實(shí)驗(yàn)治療組。HE染色觀察再灌注12h，24h，48h,72h視網(wǎng)膜組織形態(tài)改變并利用免疫組織化學(xué)方法檢測caspase-3表達(dá)。Western-blot方法檢測再灌注24h Cytochrome C表達(dá)。利用免疫組織熒光方法檢測再灌注7d后，Thy1-1標(biāo)記RGCs并計(jì)數(shù)。SPSS21.0軟件進(jìn)行

4、數(shù)據(jù)分析，定量結(jié)果用(x)±s表示，界定P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.HE觀察大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)及結(jié)構(gòu)改變:空白對照組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)清晰;實(shí)驗(yàn)對照組視網(wǎng)膜水腫，結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)量明顯減少;與實(shí)驗(yàn)對照組相比，實(shí)驗(yàn)治療組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)較完整，水腫程度輕，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞數(shù)量也較多。
　　2.免疫組化:空白對照組視網(wǎng)膜各層caspase-3幾乎無表達(dá);實(shí)驗(yàn)對照組Caspase-3表達(dá)明顯增加

5、;實(shí)驗(yàn)治療組較實(shí)驗(yàn)對照組Caspase-3表達(dá)減少。Caspase-3表達(dá)主要集中在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層，隨時間變化呈現(xiàn)先增高、后降低趨勢，24h組Caspase-3表達(dá)量最高。各時間亞組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.Western-blot:空白對照組Cytochrome C表達(dá)微弱，實(shí)驗(yàn)對照組CytochromeC表達(dá)迅速增加，實(shí)驗(yàn)治療組較實(shí)驗(yàn)對照組Cytochrome C表達(dá)減少。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P＜0.05)。
　　4.免疫熒光:空白對照組RGCs計(jì)數(shù)結(jié)果為15.90±1.20個/視野;實(shí)驗(yàn)對照組RGCs明顯減少，計(jì)數(shù)結(jié)果為7.70±2.31個/視野;實(shí)驗(yàn)治療組RGCs較實(shí)驗(yàn)對照組增多，計(jì)數(shù)結(jié)果為10.70±2.11個/視野。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.提高前房灌注壓制作視網(wǎng)膜缺血再灌注模型可導(dǎo)致大鼠視網(wǎng)膜Cytochrome C、Caspase-3表達(dá)增多，RGCs存