基于高效能LC--MS-MS分析的新型抗艾滋病復(fù)方藥物的臨床前藥代動力學(xué)研究.pdf

1、新型抗艾滋病復(fù)方藥物（富馬酸替諾福韋酯200mg+拉米夫定300mg+依非韋倫400mg，q.d.）是由加利福尼亞大學(xué)洛杉磯分校(UCLA)何志明院士課題組采用反饋系統(tǒng)控制(FSC)技術(shù)按照不同藥物組合和劑量進(jìn)行測試篩選優(yōu)化得到的低毒高效的抗艾滋病復(fù)方藥物。本課題建立高靈敏度、高特異性的LC-MS/MS方法對新型抗艾滋病復(fù)方藥物進(jìn)行了臨床前藥代動力學(xué)研究，了解其在動物體內(nèi)吸收、分布、代謝及排泄等藥動學(xué)及其相互作用過程，為新藥的申報和進(jìn)一

2、步臨床試驗研究提供試驗資料和參考依據(jù)。
　　一、生物樣品中替諾福韋、拉米夫定及依非韋倫定量分析方法的建立與確證
　　本文建立了快速、靈敏、可靠的LC-MS/MS方法測定不同生物樣品中替諾福韋(TEF)、拉米夫定(3TC)及依非韋倫(EFV)的濃度。選用阿昔洛韋(ACV)、雙氫氯噻嗪(HCT)及恩曲他濱(FTC)作內(nèi)標(biāo)，樣品采用蛋白沉淀法處理，色譜柱選用AgilentZORBAX SB-Aq(4.6×150mm，5μm)和Ul

3、timate XB-C18(4.6×50mm，5μm);流動相為甲醇-水（25mM醋酸銨+0.1％甲酸）和乙腈-水（0.1％甲酸）;梯度洗脫，流速為1mL/min，3∶7分流。采用ESI離子源，MRM檢測模式，正離子掃描模式下，用于定量的離子通道分別為m/z288.3→176.4(TEF)、m/z230.3→111.9(3TC)、m/z316.0→244.0(EFV)、m/z226.1→152.2(ACV,IS)、m/z247.8→12

4、9.9/101.1(FTC,IS);負(fù)離子掃描模式下，用于定量的離子通道分別為m/z314.0→243.9(EFV)、m/z296.0→204.8(HCT，IS);不同生物樣品中TEF、3TC及EFV定量分析方法學(xué)驗證結(jié)果均符合FDA、CFDA等頒布的生物樣品定量分析相關(guān)指導(dǎo)原則且成功應(yīng)用于新型抗艾滋復(fù)方藥物的臨床前藥代動力學(xué)研究。
　　二、新型抗艾滋病復(fù)方藥物在Beagle犬體內(nèi)藥代動力學(xué)相互作用研究
　　采用自身對照、隨

5、機(jī)交叉試驗方法對新型抗艾滋病復(fù)方藥物在Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)相互作用進(jìn)行評價。通過比較Beagle犬單劑量口服給藥抗艾滋病單一組分和復(fù)方藥物后體內(nèi)TEF、3TC及EFV的藥時曲線及相應(yīng)藥動學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)不同Beagle犬個體間差異較大，而TEF、3TC及EFV的主要藥代動力學(xué)參數(shù)均不存在顯著性差異(P＞0.05)，即不存在藥物相互作用。提示TEF、3TC與EFV不存在相互作用，是否與Beagle犬個體差異大而掩蓋了藥物相互作用相關(guān)

6、有待進(jìn)一步的考察研究。
　　三、新型抗艾滋病復(fù)方藥物在Beagle犬體內(nèi)藥代動力學(xué)研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復(fù)方藥物在Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程進(jìn)行考察。對Beagle犬單劑量口服給藥低、中、高三個劑量組抗艾滋病復(fù)方藥物后體內(nèi)TEF、3TC及EFV的藥動學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0-τ與相對應(yīng)的給藥劑量進(jìn)行線性回歸，得TEF的相關(guān)系數(shù)為R2=0.4214(Cmax)和R2=0.6849(AUC0-τ)

7、，3TC的相關(guān)系數(shù)為R2=0.7889(Cmax)和R2=0.8286(AUC0-τ)，提示TEF和3TC的藥動學(xué)參數(shù)AUC0-τ與給藥劑量基本呈正相關(guān)，而EFV的相關(guān)系數(shù)僅為R2=0.2289(Cmax)和R2=0.3047(AUC0-τ)。Beagle犬多劑量給藥復(fù)方藥物第四天后，體內(nèi)TEF、3TC及EFV的血藥濃度基本上達(dá)到穩(wěn)態(tài)。單劑量和多劑量口服給藥抗艾滋病復(fù)方藥物后TEF、3TC及EFV的平均藥時曲線AUC累積比分別為1.89

8、、0.95和1.17。以藥物生物等效性的接受標(biāo)準(zhǔn)為參比（上限界定為1.25），提示連續(xù)給藥7天后TEF在Beagle犬體內(nèi)有蓄積，3TC及EFV無蓄積。
　　四、新型抗艾滋病復(fù)方藥物在SD大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復(fù)方藥物在SD大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)及相互作用進(jìn)行考察。對SD大鼠單劑量口服給藥低、中、高三個劑量組抗艾滋病復(fù)方藥物后體內(nèi)TEF、3TC及EFV的藥動學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0-τ

9、與相應(yīng)給藥劑量進(jìn)行線性回歸，得TEF相關(guān)系數(shù)為R2=0.3035(Cmax)和R2=0.7803(AUC0-τ)，3TC相關(guān)系數(shù)為R2=0.6134(Cmax)和R2=0.8646(AUC0-τ)，EFV相關(guān)系數(shù)為R2=0.6886(Cmax)和R2=0.5314(AUC0-τ)，提示TEF、3TC及EFV的藥動學(xué)參數(shù)AUC0-τ與給藥劑量基本呈正相關(guān)。比較SD大鼠單劑量口服給藥抗艾滋病復(fù)方藥物各單一組分和復(fù)方藥物后體內(nèi)TEF、3TC及

10、EFV的藥時曲線及相應(yīng)藥動學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)TEF及3TC各參數(shù)無顯著性差異(P＞0.05);EFV的藥動學(xué)參數(shù)Cmax、MRT存在顯著性差異(P＜0.05)。提示SD大鼠口服給藥抗艾滋病復(fù)方藥物后對TEF、3TC體內(nèi)藥代動力學(xué)無顯著影響，對EFV在體內(nèi)的吸收、消除過程有一定的影響，即可能存在藥物間相互作用。
　　五、新型抗艾滋病復(fù)方藥物在SD大鼠體內(nèi)組織分布及排泄研究
　　采用LC-MS/MS法對新型抗艾滋病復(fù)方藥物在SD大鼠體

11、內(nèi)主要臟器組織中的分布狀況及其排泄特征進(jìn)行研究。從抗艾滋病復(fù)方藥物在各組織中的分布結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，富馬酸替諾福韋酯(TDF)經(jīng)胃腸道吸收后迅速代謝成TEF，在腎臟中分布最快、濃度最高，肝臟次之。TEF不易通過血腦屏障進(jìn)入腦組織，在腦組織中分布較少。給藥2h后，3TC在腎組織中迅速達(dá)峰且分布濃度最高，24h仍維持較高濃度的分布。3TC在血流灌注豐富的組織（心、肝、脾、肺）中也有較為廣泛的分布且達(dá)到較高濃度水平，在腦組織中分布較少。EFV在各組

12、織中的濃度分布順序為肝＞心、脾、腎、腦＞肺。藥物EFV經(jīng)胃腸道吸收，原型藥物在肝臟中分布最快、濃度最高，其易于通過血腦屏障，因此在腦組織中濃度較高。
　　從排泄實驗結(jié)果中可以看出，SD大鼠口服給藥抗艾滋病復(fù)方藥物后，TDF主要以代謝物TEF形式從尿液、糞便及膽汁中排泄，平均累積排泄率分別為12.50％、28.84％和0.285％;3TC在尿液、糞便和膽汁中的平均累積排泄率分別為21.37％、27.61％和1.293％，主要以原型形