CGRP作用下的MG63蛋白質(zhì)差異表達(dá)的實驗研究.pdf

1、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)是一種感覺神經(jīng)肽，在骨組織中的分布廣泛，主要分布于骨代謝活躍的部位，直接或間接地調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化及活性。目前的研究表明CGRP在骨折愈合中發(fā)揮重要作用。有關(guān)CGRP在成骨細(xì)胞正常代謝中的具體機(jī)制國內(nèi)外的研究較多，但對細(xì)胞蛋白表達(dá)的研究較少。
　　 本研究尋找與CGRP 相互作用、且在成骨愈合過程中起重要作用的蛋白，并且通過免疫熒

2、光等技術(shù)確定它們在信號通路中的上下游關(guān)系，從而探討CGRP在骨創(chuàng)傷愈合過程中的可能作用機(jī)制。
　　 目的：
　　 探討CGRP作用下成骨樣細(xì)胞MG-63內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化。
　　 方法：
　　 傳代培養(yǎng)MG-63 成骨樣細(xì)胞，隨機(jī)分為CGRP組和對照組。通過MTT 比色法檢測細(xì)胞生長曲線并進(jìn)行統(tǒng)計分析。提取各組MG-63內(nèi)蛋白質(zhì)，經(jīng)雙向電泳分離、考馬斯亮藍(lán)染色后掃描分析蛋白質(zhì)表達(dá)變化，選取6個差異顯著的

3、蛋白點進(jìn)行膠內(nèi)酶切、肽質(zhì)量指紋圖譜分析和IPI 數(shù)據(jù)庫檢索。并對檢索出的差異蛋白HRNR Hornerin通過western blot及免疫熒光方法進(jìn)行驗證。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTT 比色法檢測表明，CGRP 實驗組和對照組細(xì)胞生長曲線有顯著性差異。
　　 2、雙向電泳可分離(967±17)個蛋白質(zhì)，點匹配率為(85.1±1.4)％，成骨樣細(xì)胞6種蛋白點出現(xiàn)明顯差異表達(dá)，與對照組比較，CGRP組6種蛋白質(zhì)

4、表達(dá)下調(diào)。
　　 3、質(zhì)譜分析鑒定出核糖體結(jié)合蛋白p180(p180/ribosome receptor)及鈣結(jié)合蛋白HRNR Hornerin等5種蛋白質(zhì)，前者與核糖體定位和合成的新蛋白轉(zhuǎn)位有關(guān)，而后者可影響細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的。
　　 4、通過對HRNR Hornerin的western blot及免疫熒光分析，發(fā)現(xiàn)HRNR Hornerin在CGRP 實驗組中表達(dá)顯著下降。
　　 結(jié)論：
　　 1、CGR

5、P作用于成骨樣細(xì)胞(MG-63)后，顯著促進(jìn)MG-63 生長，實驗組與對照組MTT細(xì)胞生長曲線差異顯著。
　　 2、通過雙向電泳，發(fā)現(xiàn)CGRP 可誘導(dǎo)成骨樣細(xì)胞(MG-63)6個蛋白點發(fā)生表達(dá)的差異性明顯，說明CGRP 可能通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)含量或傳導(dǎo)通路的途徑發(fā)揮細(xì)胞調(diào)節(jié)作用。
　　 3、質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定出的差異顯著的蛋白質(zhì)可能在CGRP作用下成骨樣細(xì)胞(MG-63)中發(fā)揮著直接或間接的作用。CGRP 可能通過這幾種蛋白參